 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3621 | 回復(fù): 15 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
銀小耳金蟲 (小有名氣)
|
[交流]
感受態(tài)轉(zhuǎn)化及陽性克隆出現(xiàn)問題 已有6人參與
|
||
|
大腸桿菌DH5a感受態(tài)轉(zhuǎn)化 1、從-70℃冰箱中取感受態(tài)細胞懸液,冰上解凍5min。 2、 加入連接產(chǎn)物10μl (含量不超過50ng,體積不超過10μl),輕輕彈勻,冰上放置30min。 3、42℃水浴中熱擊90秒,熱擊后迅速置于冰上冷卻3min。 4、向管中加入1ml LB液體培養(yǎng)基(不含Amp),混勻后37℃,100r/min搖床培養(yǎng)1h,使細菌恢復(fù)正常生長狀態(tài) 5、將上述菌液搖勻后取100μl 涂布于LB平板上,正面向上放置半小時,待菌液完全被培養(yǎng)基吸收后倒置培養(yǎng)皿,37℃培養(yǎng)16-24小時。 PCR驗證陽性克隆 1.使用無菌白槍頭將轉(zhuǎn)化后長出的白色單菌落點種轉(zhuǎn)移到含有氨芐青霉素的平板上，37℃過夜培養(yǎng) 2.挑取氨芐平板上的單菌落到含氨芐的LB液體培養(yǎng)基中，180rpm/min，37℃搖床培養(yǎng)3h 3.取2ml菌液作為PCR模板，PCR反應(yīng)引物為T載體通用引物：RV-M和M13-17 4.PCR反應(yīng)結(jié)束后，進行瓊脂糖凝膠電泳，排除部分假陽性克隆片段 實驗每次都是卡在PCR驗證陽性克隆的第二步，37度搖床培養(yǎng)3h后培養(yǎng)基都很澄清，基本沒有菌長出來，之前條白色單菌落到含氨芐的LB液體培養(yǎng)基中時，明顯可以看到菌落接進去了呀，求大神幫幫忙看到底是哪里出了差錯？？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有192人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
天津商業(yè)大學(xué) 生物與醫(yī)藥課題組招生
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
生物化工學(xué)碩招收調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 質(zhì)粒非單克隆，怎么辦？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 膠回收產(chǎn)物連入克隆載體進行轉(zhuǎn)化，結(jié)果第二天沒有菌落長出。怎么回事兒？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- Top10感受態(tài)是dam陽性的嗎
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 克隆轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化子就是不含目的基因。
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后涂布，陰性對照培養(yǎng)皿上長有一兩個菌落，能否繼續(xù)在陽性平皿上挑單克��？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 令我崩潰的TA克隆，老是連不上
已經(jīng)有33人回復(fù)
- 克隆方面的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 連接轉(zhuǎn)化假陽性提不出來質(zhì)粒嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求助分子克隆問題——挑不出陽性克��！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 克隆基因，用PMD19-T載體轉(zhuǎn)天根的感受態(tài)細胞，菌落少，測的序列全是空載體，求原因·
已經(jīng)有21人回復(fù)
- T載體克隆做不出來，求幫助
已經(jīng)有24人回復(fù)
- TA克隆電擊法轉(zhuǎn)化的步驟
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后單克隆都一樣嗎
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 基因克隆過程中質(zhì)粒、感受態(tài)細胞對氨芐的抗性
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 請教一下，這是否為假陽性克隆的問題，如果是，該如何提高陽性克隆效率？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 陽性克隆的篩選問題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 最近做T克隆都是陰性，怎么回事？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后陽性克隆長得比較慢是什么原因？！
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 大腸桿菌DH5α感受態(tài)制備
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 我將1質(zhì)粒連在BK載體上，但是陽性克隆鑒定一直是陰性，什么原因呢
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【專題】------------------感受態(tài)、轉(zhuǎn)化專題------------------
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 做電轉(zhuǎn)感受態(tài)時有染菌的嗎
已經(jīng)有15人回復(fù)
lairongpeng
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 1163.6
- 散金: 58
- 紅花: 1
- 帖子: 374
- 在線: 159小時
- 蟲號: 2428081
- 注冊: 2013-04-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
5樓2014-04-18 20:50:23
2樓2014-04-18 17:50:23
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 639 (博士)
- 金幣: 8720.2
- 紅花: 37
- 帖子: 1700
- 在線: 269.3小時
- 蟲號: 322365
- 注冊: 2007-03-11
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
3樓2014-04-18 17:55:58
kueradi
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 20 (小學(xué)生)
- 金幣: 1441.5
- 紅花: 2
- 帖子: 126
- 在線: 249.6小時
- 蟲號: 2263328
- 注冊: 2013-01-27
- 專業(yè): 細胞死亡
4樓2014-04-18 20:09:06
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +6 | kiyy 2026-04-01 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600，320分求調(diào)劑 +5 | 大饞小子 2026-04-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0832食品科學(xué)與工程學(xué)碩282調(diào)劑 +4 | 魚在水中游a 2026-04-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | 1314捧花 2026-04-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +9 | Gs大王 2026-04-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +16 | zchqwer 2026-04-01 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +12 | Amber00 2026-03-31 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京科技，085601總分305求調(diào)劑 +9 | 半生瓜！ 2026-04-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程專碩324分，一志愿中國礦業(yè)大學(xué)求調(diào)劑 +7 | 耿耿1314 2026-04-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +12 | 素年祭語 2026-03-31 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 0856，269分求調(diào)劑 +8 | 有學(xué)上就行求求?/a> 2026-03-30 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +5 | Sa67890. 2026-04-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求0861交通運輸專碩or材料專碩調(diào)劑 +4 | 勒布朗@ 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311（085601）求調(diào)劑 +12 | liziyeyeye 2026-03-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 080200學(xué)碩，機械工程專業(yè)277分，求帶走！ +4 | 瓶子PZ 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277跪求調(diào)劑 +8 | 1915668 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 末未mm 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +8 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 356求調(diào)劑 +3 | gysy?s?a 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +4 | AZMK 2026-03-27 | 7/350 |
|