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His-Tag純化遇到的問題 已有3人參與
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最近開始做蛋白的純化，希望能拿到高純度的酶，蛋白是可溶性表達，所以直接拿上清液做的Ni柱純化，可是發(fā)現(xiàn)不掛住，標簽是在N端，推測是His標簽被包裹了，所以用8M尿素溶解，變成線性之后又做了純化，發(fā)現(xiàn)可以純化出來了，驗證了我的推測。但是我要的是可溶性表達，我該怎么解決His標簽被包含的問題呢？不能做復(fù)性，我要的量比較大，需要可溶性表達。 我查資料發(fā)現(xiàn)可以加自己設(shè)計加His的長度，如果有誰知道方法的話交流一下。我的質(zhì)粒C端沒有His標簽，如果要加只能手動加，但是不知道怎么設(shè)計引物，因為在酶切位點之后了~ |
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2樓2015-07-14 17:05:08
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4樓2015-08-25 11:37:18
5樓2016-09-08 09:42:08
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