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hyhl鐵桿木蟲 (小有名氣)
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[求助]
His Tag融合蛋白純化
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| pET-28a/BL21表達(dá)得到目的蛋白，部分可溶，部分包涵體，使用Novagen的kit對可溶蛋白進(jìn)行純化遇到如下問題：使用BugBuster抽提試劑處理菌液后得到可用于上柱純化的蛋白溶液置于4度保存過夜均發(fā)生沉淀，-20度凍存也出現(xiàn)沉淀（電泳檢測過，目的蛋白就在沉淀中），這樣還能繼續(xù)上柱純化可溶性蛋白嗎？怎樣才能使蛋白不發(fā)生沉淀？有人遇到類似的問題嗎？請各位高手指點(diǎn)。 |
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dshlove
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2樓2012-09-18 15:45:45
hyhl
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3樓2012-09-19 10:30:53
dshlove
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6樓2012-09-20 09:55:45
hyhl
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| 蛋白是溶在抽提試劑里的，試劑盒提供的，含有1M NaCl，沒有變性，也沒加任何其他的東西，包括還原劑等。我希望得到的是可溶性的蛋白。剛剛抽提完對沉淀和上清進(jìn)行電泳檢測后確認(rèn)目的蛋白是在上清里的，我將該上清溶液剛在冰箱里過夜，準(zhǔn)備第二天用樹脂進(jìn)行純化的，但是發(fā)現(xiàn)溶液里出現(xiàn)沉淀了。我對發(fā)生沉淀的溶液離心后的上清和沉淀進(jìn)行了電泳檢測，目的蛋白基本都在沉淀里，因此我認(rèn)為是我的蛋白發(fā)生了沉淀�，F(xiàn)在請各位指教有什么辦法阻止沉淀的出現(xiàn)。不知道加些增容的試劑會不會影響后續(xù)的純化？ |
7樓2012-09-20 17:59:41
hyhl
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9樓2013-03-14 02:31:03
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