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moyunzhi銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于western blot的問題一大堆，求給位幫忙解答下之2（補充） 已有1人參與
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發(fā)完第一個帖子，就又想到了一大堆的問題。再補刀一下。望大牛們的解答！ 1.在SDS-PAGE電泳時， 分離膠的 濃度與分離的蛋白質(zhì)大小的關(guān)系是怎么樣的？另外，我如果分離一個225KD的蛋白，用8%的分離膠，另外我還需要檢測一個35KD的蛋白，會不會影響很大？ 2.為什么濃縮膠基本上都是4%的？這是經(jīng)驗所得？還是有一定原理？ 3.公司賣的MARKER，可以自己做嗎？為什么marker上有的蛋白可以顯出顏色？（我猜測公司是將不同大小的蛋白分開提純的，對其中一部分蛋白用染料結(jié)合。最后混勻出售？不知道有沒有道理？） 4.蛋白的上樣量是不是根據(jù)蛋白的濃度確定的？一般蛋白的濃度需要在多少可以顯出適當(dāng)?shù)念伾�？（或者說其濃度要視蛋白的抗原表位的多上也就是一抗對此的效價多少來單獨確定？） 就是這些了。小弟還在大二，跟著老師做實驗，可以老師每天都很忙，一問問題，老師就說自己去查。可是度娘不太靠譜，搜出來的都不是我想問的。簡直是浪費我時間。這些問題又沒有人提問過，少有人知道。實驗室里的其他伙伴更是一問三不知。做這個實驗心太累了（從暑假開始一直在做，每天就這樣單調(diào)的重復(fù)著，一點希望的影子都看不到，我覺得自己已經(jīng)很有耐心了吧？）。沒有人知道。照著步驟做（因為這還是預(yù)實驗，很多條件都還在摸索中，有種盲人摸象的感覺），又常常出現(xiàn)問題。每一次失敗，都會很沮喪。 小弟又不知道該怎樣去分析問題。從來沒人教過，老師總是匆匆出現(xiàn)問幾個問題，變一個條件又接著做，我簡直無語到底。查資料又該如何開始呢?真希望有一位大神來指點下小弟。小弟實在困惑啊！ |
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