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ELISA陰性對(duì)照顯色問(wèn)題 已有2人參與
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原理：檢測(cè)蛋白與結(jié)合蛋白能夠相互作用結(jié)合，結(jié)合蛋白帶C-FC標(biāo)簽，最后加入FC抗體（帶HRP),TMB顯色。 檢測(cè)蛋白：A1-A8，B1-B8(復(fù)孔) 陰性對(duì)照：A9-A10，B9-B10(復(fù)孔) 說(shuō)明：1-8中結(jié)合蛋白濃度依次減半，陰性對(duì)照中所加的結(jié)合蛋白濃度與A1相同。陰性對(duì)照用BSA包板，其他的操作與檢測(cè)孔一樣。 問(wèn)題：為什么我的陰性對(duì)照顏色這么深？我自己感覺(jué)我的封閉和洗脫沒(méi)有問(wèn)題，BSA沒(méi)有污染，但就是找不到原因，折騰了一個(gè)月了，哪位大神指點(diǎn)一下，感激不盡�。。⌒〉艿慕饚艛�(shù)很少，全部拿出。感謝！ 具體步驟： 1. 包被：檢測(cè)蛋白按1ul/ml的濃度包板，條件4℃過(guò)夜。 2. 洗滌：PBS清洗3次，每次2min。 3. 封閉：用3% BSA ,室溫1h。 4. 洗滌：PBS清洗3次，每次2min。 5. 結(jié)合：加入結(jié)合蛋白，37℃ 1h。 6. 洗滌：PBST清洗3次，每次2min 7. 雜交：用1%的BSA配制anti-FC抗體（比例1；10000），37℃ 1h。 8. 洗滌：PBST清洗3次，每次2min。 9. 反應(yīng)：TMB溶液避光37℃15min左右。 10. 終止：1M HCL終止。 QQ.png |
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