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jinshengfang木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
求實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中噬菌體鑒定方法 已有2人參與
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| 實(shí)驗(yàn)室BL21（DE3）染噬菌體，后來(lái)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)甲醛熏蒸，求甲醛熏蒸效果及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中噬菌體鑒定方法 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
jinshengfang: 金幣+20, ★★★很有幫助, 謝謝 2015-08-13 17:07:00
zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，回答的很詳細(xì) 2015-08-13 20:42:15
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一般情況下，空氣中噬菌體的含量還是很少，一般不足以造成染噬菌體情況的發(fā)生。但實(shí)驗(yàn)室若長(zhǎng)期做某一種菌的實(shí)驗(yàn)，或?qū)嶒?yàn)室有在做噬菌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)的話，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中噬菌體含量升高，就會(huì)造成噬菌體污染情況的發(fā)生。 特別是對(duì)于發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)，噬菌體污染是一個(gè)常見(jiàn)且負(fù)責(zé)的問(wèn)題，至今還沒(méi)有完美的解決方法，只能是采取措施來(lái)防治。常見(jiàn)的噬菌體污染防治措施有： 1、防止噬菌體的入侵和蔓延 為防止噬菌體的污染，一定要保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔，對(duì)實(shí)驗(yàn)常用到的設(shè)備、器皿、材料等進(jìn)行滅菌處理，對(duì)實(shí)驗(yàn)菌種進(jìn)行妥善的保存等。 2、選用抗噬菌體突變株 當(dāng)然了，這一方法成本較高，一般實(shí)驗(yàn)室選用不了。 3、噬菌體爆發(fā)后采取措施進(jìn)行防治 用次氯酸鈉將房間整個(gè)清潔消毒，所有器具高溫滅菌或用次氯酸鈉浸泡。 地面用量：有效氯濃度2500ppm，大于30min； 器具：有效氯濃度500ppm，20min。搖床用甲醛加高錳酸鉀熏蒸，用前再用紫外照射半小時(shí)； 發(fā)酵罐高溫滅菌。 如果空氣中噬菌體濃度也較高的話，可以用甲醛熏蒸，3g/平米；或用紫外照射，但要注意，因?yàn)檫@兩種方法都可能對(duì)儀器造成腐蝕。 空氣中噬菌體的檢測(cè)：雙層平板法，下層是生產(chǎn)菌或敏感菌的培養(yǎng)基，上層是營(yíng)養(yǎng)肉湯軟瓊脂，雙層瓊脂板開(kāi)蓋放30min，30度培養(yǎng)過(guò)夜。看有無(wú)噬菌斑。 當(dāng)然了，這一方法適合空氣中噬菌體濃度較高的情況。如空氣中噬菌體濃度一般，建議可先用空氣抽濾器，之后將吸附于膜上的物質(zhì)用適量的緩沖液洗脫，雙層平板法檢測(cè)洗脫液中噬菌體的量即可。 |
3樓2015-08-13 13:18:04
a86052
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2樓2015-08-13 08:52:24
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4樓2015-08-13 17:10:00
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【答案】應(yīng)助回帖
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jinshengfang: 金幣+25, ★★★★★最佳答案, 非常感謝，多多交流 2015-09-02 14:29:04
jinshengfang: 金幣+25, ★★★★★最佳答案, 非常感謝，多多交流 2015-09-02 14:29:04
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你好！因?yàn)榍耙欢螘r(shí)間一直在忙著寫(xiě)文章，就沒(méi)有及時(shí)的回復(fù)你，不好意思哈~ 敏感菌，特別是針對(duì)噬菌體的敏感菌，通俗的說(shuō)，就是能被某一種或某一類(lèi)噬菌體侵染、裂解的菌株，如你們實(shí)驗(yàn)室用到的大腸桿菌BL21（DE3），根據(jù)我們實(shí)驗(yàn)室做出的結(jié)果看，該菌對(duì)烈性噬菌體均敏感（即烈性噬菌體都可以使之裂解），也就是說(shuō)大腸桿菌BL21（DE3）可以作為檢測(cè)烈性噬菌體的敏感性菌株。 另外，本著試驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度，溶原性噬菌體在某些外界環(huán)境發(fā)生變化時(shí)也會(huì)轉(zhuǎn)化為裂解性噬菌體，最常見(jiàn)的就是λ噬菌體了。假如你需要檢測(cè)λ噬菌體的話，呵呵，還真是蠻巧的，前一段時(shí)間因?qū)嶒?yàn)需要我剛找到了λ噬菌體的敏感菌株。該菌株標(biāo)號(hào)CCTCC AB 2013330（λ噬菌體敏感菌株），該菌株可在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79）找到，我問(wèn)過(guò)，價(jià)錢(qián)也不貴，需要的話，你可以從該保藏中心購(gòu)買(mǎi)。 之前看過(guò)并回復(fù)過(guò)你發(fā)的帖子，綜合你提起的問(wèn)題，我懷疑你們實(shí)驗(yàn)室的噬菌體污染來(lái)自環(huán)境中，詳細(xì)解答見(jiàn)之前回復(fù)過(guò)你的帖子。 最后多說(shuō)一句哈，我不是高手，只是一個(gè)從事噬菌體方面相關(guān)研究的研究生，還在進(jìn)一步的學(xué)習(xí)之中，畢竟學(xué)無(wú)止境，我離高手這個(gè)稱(chēng)呼還早得很，希望能多多的交流~ 希望我的回答能對(duì)你的實(shí)驗(yàn)有所幫助~ |
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caoqingqing5樓2015-08-27 01:29:07
caoqingqing
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6樓2016-03-24 09:12:13
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你好~ 最直觀的常規(guī)檢測(cè)噬菌體的方法是雙層平板法，因?yàn)樯婕暗绞菧睾褪删w，其在雙層平板上一般不會(huì)形成噬菌斑。為使溫和噬菌體轉(zhuǎn)化為裂性，一般會(huì)采取改變外界培養(yǎng)條件或是人為的加入化學(xué)制劑（具體是哪幾種我記得不是很清楚了）、物理因子（最常用的是紫外線照射）對(duì)其進(jìn)行刺激，從而使溶原性轉(zhuǎn)化為烈性。 關(guān)于紫外線誘發(fā)溶原性噬菌體的轉(zhuǎn)化過(guò)程，你可以參照中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79）關(guān)于λ噬菌體的敏感菌株CCTCC AB 2013330的介紹，該網(wǎng)頁(yè)上有一個(gè)PDF格式的文檔，其中詳細(xì)的說(shuō)明了該實(shí)驗(yàn)步驟~ 對(duì)于某一類(lèi)的溫和噬菌體，大多數(shù)的該類(lèi)宿主均為敏感株，但具體的可能還需要你進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)和驗(yàn)證。 |
7樓2016-05-27 01:55:02
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