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jinshengfang木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中噬菌體鑒定方法 已有2人參與
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| 實(shí)驗(yàn)室BL21(DE3)染噬菌體,后來實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過甲醛熏蒸,求甲醛熏蒸效果及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中噬菌體鑒定方法 |

銀蟲 (正式寫手)
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你好~ 最直觀的常規(guī)檢測(cè)噬菌體的方法是雙層平板法,因?yàn)樯婕暗绞菧睾褪删w,其在雙層平板上一般不會(huì)形成噬菌斑。為使溫和噬菌體轉(zhuǎn)化為裂性,一般會(huì)采取改變外界培養(yǎng)條件或是人為的加入化學(xué)制劑(具體是哪幾種我記得不是很清楚了)、物理因子(最常用的是紫外線照射)對(duì)其進(jìn)行刺激,從而使溶原性轉(zhuǎn)化為烈性。 關(guān)于紫外線誘發(fā)溶原性噬菌體的轉(zhuǎn)化過程,你可以參照中國典型培養(yǎng)物保藏中心(http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79)關(guān)于λ噬菌體的敏感菌株CCTCC AB 2013330的介紹,該網(wǎng)頁上有一個(gè)PDF格式的文檔,其中詳細(xì)的說明了該實(shí)驗(yàn)步驟~ 對(duì)于某一類的溫和噬菌體,大多數(shù)的該類宿主均為敏感株,但具體的可能還需要你進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)和驗(yàn)證。 |
金蟲 (正式寫手)
銀蟲 (正式寫手)
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一般情況下,空氣中噬菌體的含量還是很少,一般不足以造成染噬菌體情況的發(fā)生。但實(shí)驗(yàn)室若長期做某一種菌的實(shí)驗(yàn),或?qū)嶒?yàn)室有在做噬菌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)的話,實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中噬菌體含量升高,就會(huì)造成噬菌體污染情況的發(fā)生。 特別是對(duì)于發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn),噬菌體污染是一個(gè)常見且負(fù)責(zé)的問題,至今還沒有完美的解決方法,只能是采取措施來防治。常見的噬菌體污染防治措施有: 1、防止噬菌體的入侵和蔓延 為防止噬菌體的污染,一定要保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔,對(duì)實(shí)驗(yàn)常用到的設(shè)備、器皿、材料等進(jìn)行滅菌處理,對(duì)實(shí)驗(yàn)菌種進(jìn)行妥善的保存等。 2、選用抗噬菌體突變株 當(dāng)然了,這一方法成本較高,一般實(shí)驗(yàn)室選用不了。 3、噬菌體爆發(fā)后采取措施進(jìn)行防治 用次氯酸鈉將房間整個(gè)清潔消毒,所有器具高溫滅菌或用次氯酸鈉浸泡。 地面用量:有效氯濃度2500ppm,大于30min; 器具:有效氯濃度500ppm,20min。搖床用甲醛加高錳酸鉀熏蒸,用前再用紫外照射半小時(shí); 發(fā)酵罐高溫滅菌。 如果空氣中噬菌體濃度也較高的話,可以用甲醛熏蒸,3g/平米;或用紫外照射,但要注意,因?yàn)檫@兩種方法都可能對(duì)儀器造成腐蝕。 空氣中噬菌體的檢測(cè):雙層平板法,下層是生產(chǎn)菌或敏感菌的培養(yǎng)基,上層是營養(yǎng)肉湯軟瓊脂,雙層瓊脂板開蓋放30min,30度培養(yǎng)過夜?从袩o噬菌斑。 當(dāng)然了,這一方法適合空氣中噬菌體濃度較高的情況。如空氣中噬菌體濃度一般,建議可先用空氣抽濾器,之后將吸附于膜上的物質(zhì)用適量的緩沖液洗脫,雙層平板法檢測(cè)洗脫液中噬菌體的量即可。 |
木蟲 (正式寫手)

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