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jinshengfang木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求實驗室環(huán)境中噬菌體鑒定方法 已有2人參與
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| 實驗室BL21（DE3）染噬菌體，后來實驗室經(jīng)過甲醛熏蒸，求甲醛熏蒸效果及實驗室環(huán)境中噬菌體鑒定方法 |
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2樓2015-08-13 08:52:24
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
jinshengfang: 金幣+20, ★★★很有幫助, 謝謝 2015-08-13 17:07:00
zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵應(yīng)助，回答的很詳細 2015-08-13 20:42:15
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zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵應(yīng)助，回答的很詳細 2015-08-13 20:42:15
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一般情況下，空氣中噬菌體的含量還是很少，一般不足以造成染噬菌體情況的發(fā)生。但實驗室若長期做某一種菌的實驗，或?qū)嶒炇矣性谧鍪删w相關(guān)實驗的話，實驗室環(huán)境中噬菌體含量升高，就會造成噬菌體污染情況的發(fā)生。 特別是對于發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)，噬菌體污染是一個常見且負責的問題，至今還沒有完美的解決方法，只能是采取措施來防治。常見的噬菌體污染防治措施有： 1、防止噬菌體的入侵和蔓延 為防止噬菌體的污染，一定要保持實驗室環(huán)境的清潔，對實驗常用到的設(shè)備、器皿、材料等進行滅菌處理，對實驗菌種進行妥善的保存等。 2、選用抗噬菌體突變株 當然了，這一方法成本較高，一般實驗室選用不了。 3、噬菌體爆發(fā)后采取措施進行防治 用次氯酸鈉將房間整個清潔消毒，所有器具高溫滅菌或用次氯酸鈉浸泡。 地面用量：有效氯濃度2500ppm，大于30min； 器具：有效氯濃度500ppm，20min。搖床用甲醛加高錳酸鉀熏蒸，用前再用紫外照射半小時； 發(fā)酵罐高溫滅菌。 如果空氣中噬菌體濃度也較高的話，可以用甲醛熏蒸，3g/平米；或用紫外照射，但要注意，因為這兩種方法都可能對儀器造成腐蝕。 空氣中噬菌體的檢測：雙層平板法，下層是生產(chǎn)菌或敏感菌的培養(yǎng)基，上層是營養(yǎng)肉湯軟瓊脂，雙層瓊脂板開蓋放30min，30度培養(yǎng)過夜。看有無噬菌斑。 當然了，這一方法適合空氣中噬菌體濃度較高的情況。如空氣中噬菌體濃度一般，建議可先用空氣抽濾器，之后將吸附于膜上的物質(zhì)用適量的緩沖液洗脫，雙層平板法檢測洗脫液中噬菌體的量即可。 |
3樓2015-08-13 13:18:04
jinshengfang
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4樓2015-08-13 17:10:00
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【答案】應(yīng)助回帖
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jinshengfang: 金幣+25, ★★★★★最佳答案, 非常感謝，多多交流 2015-09-02 14:29:04
jinshengfang: 金幣+25, ★★★★★最佳答案, 非常感謝，多多交流 2015-09-02 14:29:04
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你好！因為前一段時間一直在忙著寫文章，就沒有及時的回復(fù)你，不好意思哈~ 敏感菌，特別是針對噬菌體的敏感菌，通俗的說，就是能被某一種或某一類噬菌體侵染、裂解的菌株，如你們實驗室用到的大腸桿菌BL21（DE3），根據(jù)我們實驗室做出的結(jié)果看，該菌對烈性噬菌體均敏感（即烈性噬菌體都可以使之裂解），也就是說大腸桿菌BL21（DE3）可以作為檢測烈性噬菌體的敏感性菌株。 另外，本著試驗嚴謹?shù)膽B(tài)度，溶原性噬菌體在某些外界環(huán)境發(fā)生變化時也會轉(zhuǎn)化為裂解性噬菌體，最常見的就是λ噬菌體了。假如你需要檢測λ噬菌體的話，呵呵，還真是蠻巧的，前一段時間因?qū)嶒炐枰覄傉业搅甩耸删w的敏感菌株。該菌株標號CCTCC AB 2013330（λ噬菌體敏感菌株），該菌株可在中國典型培養(yǎng)物保藏中心（http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79）找到，我問過，價錢也不貴，需要的話，你可以從該保藏中心購買。 之前看過并回復(fù)過你發(fā)的帖子，綜合你提起的問題，我懷疑你們實驗室的噬菌體污染來自環(huán)境中，詳細解答見之前回復(fù)過你的帖子。 最后多說一句哈，我不是高手，只是一個從事噬菌體方面相關(guān)研究的研究生，還在進一步的學習之中，畢竟學無止境，我離高手這個稱呼還早得很，希望能多多的交流~ 希望我的回答能對你的實驗有所幫助~ |
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caoqingqing5樓2015-08-27 01:29:07
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6樓2016-03-24 09:12:13
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你好~ 最直觀的常規(guī)檢測噬菌體的方法是雙層平板法，因為涉及到是溫和噬菌體，其在雙層平板上一般不會形成噬菌斑。為使溫和噬菌體轉(zhuǎn)化為裂性，一般會采取改變外界培養(yǎng)條件或是人為的加入化學制劑（具體是哪幾種我記得不是很清楚了）、物理因子（最常用的是紫外線照射）對其進行刺激，從而使溶原性轉(zhuǎn)化為烈性。 關(guān)于紫外線誘發(fā)溶原性噬菌體的轉(zhuǎn)化過程，你可以參照中國典型培養(yǎng)物保藏中心（http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79）關(guān)于λ噬菌體的敏感菌株CCTCC AB 2013330的介紹，該網(wǎng)頁上有一個PDF格式的文檔，其中詳細的說明了該實驗步驟~ 對于某一類的溫和噬菌體，大多數(shù)的該類宿主均為敏感株，但具體的可能還需要你進一步的實驗檢測和驗證。 |
7樓2016-05-27 01:55:02
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