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jinggai327新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
pMD19T測(cè)序無(wú)信號(hào) 已有7人參與
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大家有沒(méi)有用過(guò)TAKARA的pMD19T載體？ 我構(gòu)建了4種質(zhì)粒，自己PCR都沒(méi)問(wèn)題，但是用pMD19T的通用引物測(cè)序時(shí)，3家測(cè)序公司都說(shuō)沒(méi)有信號(hào)，華大說(shuō)通用引物結(jié)合不上去，大家遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題嗎？ 是pMD19T載體的質(zhì)量問(wèn)題嗎？ |
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4樓2015-09-07 14:29:17
xrxleisure
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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- 專業(yè): 作物分子育種
2樓2015-09-07 13:54:12
Huobol
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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自己PCR用到載體的通用引物了嗎，一般用M13F-47和M13R-48，序列網(wǎng)上有，退火60℃即可，如果能P出亮的目的條帶就對(duì)了。也可以對(duì)篩選出的陽(yáng)性克隆進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)，就是用自己的引物和通用引物做4個(gè)組合再進(jìn)行PCR，其中只有兩個(gè)組合能P出亮帶，因?yàn)椴迦胄蛄械姆较虿淮_定。比如，用特異引物和通用引物都是下游引物以及都是上游引物時(shí)才能P出條帶，出現(xiàn)這種情況說(shuō)明序列是反向插入的。自己檢測(cè)試試吧，沒(méi)問(wèn)題的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2015-09-07 14:14:14
hbincs
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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5樓2015-09-07 15:25:06
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