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jinggai327新蟲 (初入文壇)
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[交流]
pMD19T測序無信號 已有7人參與
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大家有沒有用過TAKARA的pMD19T載體？ 我構(gòu)建了4種質(zhì)粒，自己PCR都沒問題，但是用pMD19T的通用引物測序時，3家測序公司都說沒有信號，華大說通用引物結(jié)合不上去，大家遇到過這個問題嗎？ 是pMD19T載體的質(zhì)量問題嗎？ |
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5樓2015-09-07 15:25:06
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2樓2015-09-07 13:54:12
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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自己PCR用到載體的通用引物了嗎，一般用M13F-47和M13R-48，序列網(wǎng)上有，退火60℃即可，如果能P出亮的目的條帶就對了。也可以對篩選出的陽性克隆進(jìn)行進(jìn)一步的檢測，就是用自己的引物和通用引物做4個組合再進(jìn)行PCR，其中只有兩個組合能P出亮帶，因為插入序列的方向不確定。比如，用特異引物和通用引物都是下游引物以及都是上游引物時才能P出條帶，出現(xiàn)這種情況說明序列是反向插入的。自己檢測試試吧，沒問題的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2015-09-07 14:14:14
4樓2015-09-07 14:29:17
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