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shxteacher鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
關(guān)于NTA-Ni純化帶有Flag標(biāo)簽的融合蛋白
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本人今天實驗發(fā)現(xiàn)一個奇怪的現(xiàn)象： 我講帶有Flag標(biāo)簽的融合蛋白的細(xì)胞裂解液過NTA-Ni的重力柱，然后用1xBinding buffer洗柱子（15倍柱體積），然后直接用1xStrip buffer（主要成分是EDTA溶液），并且收集1xStrip buffer的洗脫液（1倍柱體積），然后跑SDS-PAGE，發(fā)現(xiàn)存在一個比較純的而且是帶有Flag標(biāo)簽的目的蛋白。 說明：目的蛋白僅帶有Flag標(biāo)簽，不帶有His標(biāo)簽。 我很疑惑：難道Flag標(biāo)簽的融合蛋白也可以吸附在NTA-Ni重力柱？ Flag tag的蛋白序列：DYKDDDDK His tag的蛋白質(zhì)序列：HHHHHH 我在懷疑是不是Flag標(biāo)簽中含有較多的天冬氨酸，也可以螯合Ni？ 不知道有木有科研同仁遇到這樣的情況？ |
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lxzk
木蟲 (正式寫手)
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2樓2015-09-13 09:51:39
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4樓2015-09-14 09:35:45
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2015-09-14 23:07:12
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5樓2015-09-14 22:32:11
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