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[求助]
求助RNA提取電泳圖分析 已有4人參與
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有哪位大神幫忙分析下，我是提的放線菌中的RNA，第一個膠孔是2000的maker，總感覺跑出的條帶對應(yīng)的大小不太對，哪位大神幫忙分析下，謝謝 IMG_20150929_112015.jpg |
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dorecnu
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2015-09-29 22:34:38
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2015-09-29 22:34:38
| 理想的RNA提取條帶應(yīng)該是三條28S,18S,5S亮度上應(yīng)該依次減弱28S最亮，18S次之，5S最弱。但是在實際試驗中我們往往只能獲得兩條條帶，這取決于你后續(xù)的實驗精度要求，如果是普通的定量PCR的話，我倒是建議你先將這個RNA反轉(zhuǎn)錄進行后續(xù)的實驗，看看結(jié)果如何。有的物種RNA提取條帶因為復(fù)雜的原因不能呈現(xiàn)典型的三條帶，但并不影響后續(xù)的實驗。我就有師姐一直糾結(jié)與RNA條帶不清晰，但是我們后續(xù)進行芯片雜交的時候發(fā)現(xiàn)也能滿足分析的要求。所以我也建議你先進行后續(xù)的實驗看看，莫糾結(jié)。另外，從電泳圖上看，凝膠孔有雜質(zhì)，是蛋白污染的可能性比較大，所以建議你采取相應(yīng)的前處理措施。 |
3樓2015-09-29 17:08:10
然處
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2樓2015-09-29 16:58:58
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| 3樓說的比較好，你提的RNA降解的比較厲害，可以先試著做后續(xù)的實驗，我之前提的也有降解的，有的也是可以用的，如果沒有結(jié)果，重新提取RNA過程中在4度離心時速度要大一點，我們一般是12000轉(zhuǎn)，這樣會減少雜質(zhì)的殘留污染，另外提RNA盡量速度快一點，減少空氣流動就好，外部裝備像穿實驗服戴口罩這些影響沒那么嚴重，少說話就行，戴口罩比較好，RNA跑之前在70℃進行10min變性，電壓80v跑電泳3min感覺不行吧，三個條帶根本跑不開，40min可以的，你可以在20分鐘左右拿出來看一下條帶怎么樣，你1%的膠就可以了，沒必要加大濃度 |
11樓2015-09-30 17:12:09
DanceMacabre
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2015-09-29 22:34:58
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2015-09-29 22:34:58
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膠的濃度，配1.5的膠。電泳時間，3min。RNA提取過程，在冰上低溫;加乙醇洗滌后，加水溶解時，在超凈臺搞。做實驗時，穿實驗服，戴口罩。結(jié)果包你滿意。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-09-29 17:55:46
5樓2015-09-29 19:08:15
6樓2015-09-29 19:09:13
7樓2015-09-29 19:12:32
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8樓2015-09-29 19:24:09
DanceMacabre
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電泳條件就用你實驗室常規(guī)跑質(zhì)粒的條件，一般是跑1地暖yig0-15min對應(yīng)的那個電壓電流。跑RNA時只跑3-5min。切記。跑久了， 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2015-09-29 19:29:53
10樓2015-09-29 21:06:51
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