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A張盈銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助RNA提取電泳圖分析 已有4人參與
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有哪位大神幫忙分析下，我是提的放線菌中的RNA，第一個(gè)膠孔是2000的maker，總感覺跑出的條帶對(duì)應(yīng)的大小不太對(duì)，哪位大神幫忙分析下，謝謝 IMG_20150929_112015.jpg |
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-09-29 22:34:38
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-09-29 22:34:38
| 理想的RNA提取條帶應(yīng)該是三條28S,18S,5S亮度上應(yīng)該依次減弱28S最亮，18S次之，5S最弱。但是在實(shí)際試驗(yàn)中我們往往只能獲得兩條條帶，這取決于你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)精度要求，如果是普通的定量PCR的話，我倒是建議你先將這個(gè)RNA反轉(zhuǎn)錄進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，看看結(jié)果如何。有的物種RNA提取條帶因?yàn)閺?fù)雜的原因不能呈現(xiàn)典型的三條帶，但并不影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。我就有師姐一直糾結(jié)與RNA條帶不清晰，但是我們后續(xù)進(jìn)行芯片雜交的時(shí)候發(fā)現(xiàn)也能滿足分析的要求。所以我也建議你先進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)看看，莫糾結(jié)。另外，從電泳圖上看，凝膠孔有雜質(zhì)，是蛋白污染的可能性比較大，所以建議你采取相應(yīng)的前處理措施。 |
3樓2015-09-29 17:08:10
然處
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rna有些降解，分子大小的話，用marker對(duì)比也不太正確，畢竟dna和rna還有有結(jié)構(gòu)上的差別的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-09-29 16:58:58
liping121200
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| 3樓說的比較好，你提的RNA降解的比較厲害，可以先試著做后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，我之前提的也有降解的，有的也是可以用的，如果沒有結(jié)果，重新提取RNA過程中在4度離心時(shí)速度要大一點(diǎn)，我們一般是12000轉(zhuǎn)，這樣會(huì)減少雜質(zhì)的殘留污染，另外提RNA盡量速度快一點(diǎn)，減少空氣流動(dòng)就好，外部裝備像穿實(shí)驗(yàn)服戴口罩這些影響沒那么嚴(yán)重，少說話就行，戴口罩比較好，RNA跑之前在70℃進(jìn)行10min變性，電壓80v跑電泳3min感覺不行吧，三個(gè)條帶根本跑不開，40min可以的，你可以在20分鐘左右拿出來看一下條帶怎么樣，你1%的膠就可以了，沒必要加大濃度 |
11樓2015-09-30 17:12:09
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-09-29 22:34:58
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膠的濃度，配1.5的膠。電泳時(shí)間，3min。RNA提取過程，在冰上低溫;加乙醇洗滌后，加水溶解時(shí)，在超凈臺(tái)搞。做實(shí)驗(yàn)時(shí)，穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩。結(jié)果包你滿意。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-09-29 17:55:46
A張盈
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5樓2015-09-29 19:08:15
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6樓2015-09-29 19:09:13
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7樓2015-09-29 19:12:32
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8樓2015-09-29 19:24:09
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電泳條件就用你實(shí)驗(yàn)室常規(guī)跑質(zhì)粒的條件，一般是跑1地暖yig0-15min對(duì)應(yīng)的那個(gè)電壓電流。跑RNA時(shí)只跑3-5min。切記。跑久了， 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2015-09-29 19:29:53
A張盈
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10樓2015-09-29 21:06:51
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