 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (5018)
- >導(dǎo)師招生 (1089)
- >考研 (1087)
- >文獻(xiàn)求助 (270)
- >考博 (112)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (112)
- >休閑灌水 (107)
- >碩博家園 (87)
- >招聘信息布告欄 (77)
- >論文道賀祈福 (57)
- >基金申請(qǐng) (43)
- >博后之家 (36)
- >SciFinder/Reaxys (32)
- >論文投稿 (27)
- >綠色求助(高懸賞) (21)
- >有機(jī)資源 (18)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 4/1 | 返回列表 |
| 查看: 5538 | 回復(fù): 39 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
畢赤酵母高拷貝篩選 已有2人參與
|
|||
|
如題，本人新手，做蛋白分子改造的，之前將目的基因構(gòu)建在pPICZaA和pGAPZaA上并利用博萊霉素篩選高拷貝，濃度達(dá)到1ug/ml，菌落PCR后挑取陽(yáng)性菌落搖瓶表達(dá)，結(jié)果表達(dá)量極低。現(xiàn)在改變策略構(gòu)建到pPIC9K上用G418篩選高拷貝，想問(wèn)問(wèn)各位達(dá)人G418能不能和氨芐同時(shí)使用，因?yàn)橹白龅臅r(shí)候涂布His+轉(zhuǎn)化子的G418平板老是不長(zhǎng)酵母而長(zhǎng)雜菌。另外還想問(wèn)問(wèn)是不是帶有his tag的蛋白酵母的表達(dá)量會(huì)降低？因?yàn)槲蚁胍帽容^高表達(dá)量的菌株對(duì)該蛋白進(jìn)行表征。有文獻(xiàn)建議His+轉(zhuǎn)化子不經(jīng)過(guò)G418篩選高拷貝而直接以深孔板培養(yǎng)篩選高表達(dá)量菌株，各位覺(jué)得哪種方法更靠譜呢？在同一個(gè)梯度的平板上，各菌株的表達(dá)量差異會(huì)否很大？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有160人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
luwei13566
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2380655
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
|
跑個(gè)PAGE看看，如果胞內(nèi)積累的蛋白明顯那說(shuō)明你的問(wèn)題根本不是什么表達(dá)量高低，而是分泌不出去的問(wèn)題，我估計(jì)你picza用了α信號(hào)肽上的那個(gè)XHOI了，按照說(shuō)明書(shū)上那種天然N端方法只是理論上可以保留信號(hào)肽酶的切割位點(diǎn)，但實(shí)際情況無(wú)論是Kex2或ste13都會(huì)受到下游氨基酸序列的影響導(dǎo)致分泌問(wèn)題，當(dāng)然也不排除不利的發(fā)酵條件導(dǎo)致蛋白分泌失常的可能。C端帶myc和his taq不確定會(huì)不會(huì)有影響，最好做一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)。 |
33樓2015-10-09 11:26:33
★
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-10-07 22:53:11
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-10-07 22:53:11
|
梯度加壓，增加zeocin濃度，篩選到2000的濃度，調(diào)取克隆進(jìn)行表達(dá)小試進(jìn)一步篩選。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，高濃度板子上長(zhǎng)出來(lái)的克隆表達(dá)量不見(jiàn)得高，曾有過(guò)不表達(dá)的情況。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2015-10-05 00:11:58
3樓2015-10-05 00:25:14
|
最高濃度板子上挑幾個(gè)搖瓶表達(dá)檢測(cè) 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3976084924樓2015-10-05 12:29:11
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 北科281學(xué)碩材料求調(diào)劑 +11 | tcxiaoxx 2026-03-20 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +3 | 上岸吧ZJY 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +15 | Zhao anqi 2026-03-22 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 324 +4 | Promise-jyl 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +10 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
[考研] 食品專碩 一志愿雙一流 328 +3 | xiaom99 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +3 | 章小魚(yú)567 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | 孅華 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +4 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +5 | rmc8866 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無(wú)極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑，是學(xué)校就去 +8 | sllhht 2026-03-19 | 9/450 |
|