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923158905銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
二相代謝孵育體系溶液配制 已有1人參與
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想請(qǐng)教些問題，我做的是葡萄糖醛酸化反應(yīng)，關(guān)于孵育體系的配制，我需要配制四種溶液A（UDPGA）；B(D-葡萄糖二酸1,4-內(nèi)酯，丙甲菌素，MgCl2)；C（樣品溶液）；D（UGT酶溶液），然后將溶液冷凍分裝，使用時(shí)溶解移取適量體積，使孵育體系總體積為100 uL。 （1）UDPGA不太穩(wěn)定，是不是不可以配成溶液長(zhǎng)期冷凍保存，要現(xiàn)配現(xiàn)用？配成溶液冷凍保存有什么影響？ （2）我能把B溶液和D溶液配制在一起，作為一個(gè)溶液?jiǎn)幔?nbsp; （3）我只知道反復(fù)凍融對(duì)酶的活性有影響，所以要將酶溶液分裝成小份以減少凍融次數(shù)，但其他的溶液（A,B,C)還需要分裝成小份進(jìn)行保存嗎? （4）丙甲菌素在水中的溶解性怎樣啊？可以直接用緩沖液配制嗎？ 謝謝大家！ |
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tyityi5
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3樓2015-10-19 08:51:31
923158905
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2015-10-18 10:31:03
man㵘
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923158905: 金幣+30, ★★★很有幫助, 謝謝你的幫助，回答的好詳細(xì)，贊一個(gè)~\(≧▽≦)/~ 2015-10-19 21:46:02
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(1)UDPGA要現(xiàn)配現(xiàn)用。如果你真的要配成溶液冷凍，建議挑幾個(gè)對(duì)照化合物，做一下驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，看看冷凍后是否有影響。 2）不建議配在一起 3）最好都配成小份，凍存。 (4）丙甲菌素在書中溶解性一般。建議配在DMSO等有機(jī)相，配成高濃度，實(shí)驗(yàn)時(shí)取少量加到反應(yīng)體系。 PS.做科研，最好每一步都嚴(yán)格按要求來(lái)，否則一旦有問題，很難分析原因。如果想節(jié)省步奏，改變條件，一定要先做驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。 還有個(gè)問題，如果你用的是基因工程技術(shù)生成的UGT酶，應(yīng)該就不需要丙甲菌素了吧。我們用microsomes做實(shí)驗(yàn)，才加丙甲菌素，目的是穿孔，讓UGT釋放出來(lái)。 |
4樓2015-10-19 15:11:21
923158905
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5樓2015-10-19 15:41:21
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