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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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Deng_Cheng

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá) 已有3人參與

1. 當(dāng)OD=0.6左右時(shí)，加入IPTG誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)，如果設(shè)置對(duì)照為不加入IPTG，則對(duì)照組經(jīng)過(guò)相同的誘導(dǎo)條件后，菌液發(fā)生了什么變化，是一直在繁殖嗎？
2. 原核表達(dá)時(shí)，IPTG誘導(dǎo)時(shí)，如何設(shè)置對(duì)照？

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IPTG誘導(dǎo) 已經(jīng)有15人回復(fù)

1樓 2015-10-19 11:56:18

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syhzlsd

木蟲(chóng) (小有名氣)

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引用回帖:

3樓: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-10-19 15:08:50
還想請(qǐng)問(wèn)一下，對(duì)于誘導(dǎo)前后總蛋白、誘導(dǎo)后可溶性蛋白的檢測(cè)，電泳前怎么樣收集與處理菌體，制作電泳的樣品？...

1、取誘導(dǎo)后菌液500ul，離心6000rpm，5min，去上清；
2、沉淀加500ulddH2O，離心6000rpm，5min，去上清，洗去培養(yǎng)基；
3、沉淀加入70ul 2*loading buffer，煮樣100度，25min；
4、離心6000rpm，3min；
5、去上清點(diǎn)樣，5、6ul就可以了！

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4樓2015-10-19 17:40:39

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syhzlsd

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【答案】應(yīng)助回帖

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Deng_Cheng: 金幣+7, ★有幫助 2015-10-19 15:05:59
Deng_Cheng: 金幣+3 2015-10-19 19:35:22

1、菌液依舊在正常生長(zhǎng)，只是你的誘導(dǎo)溫度可能不是它的最適生長(zhǎng)溫度，所以長(zhǎng)得不一定很快；
2、對(duì)照就是不加IPTG就可以了，或者你可以加1-2%的葡萄糖在對(duì)照里，也可以用空載體做對(duì)照！

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2樓2015-10-19 13:23:48

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Deng_Cheng

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引用回帖:

2樓: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 13:23:48
1、菌液依舊在正常生長(zhǎng)，只是你的誘導(dǎo)溫度可能不是它的最適生長(zhǎng)溫度，所以長(zhǎng)得不一定很快；
2、對(duì)照就是不加IPTG就可以了，或者你可以加1-2%的葡萄糖在對(duì)照里，也可以用空載體做對(duì)照！

還想請(qǐng)問(wèn)一下，對(duì)于誘導(dǎo)前后總蛋白、誘導(dǎo)后可溶性蛋白的檢測(cè)，電泳前怎么樣收集與處理菌體，制作電泳的樣品？

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3樓2015-10-19 15:08:50

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引用回帖:

4樓: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 17:40:39
1、取誘導(dǎo)后菌液500ul，離心6000rpm，5min，去上清；
2、沉淀加500ulddH2O，離心6000rpm，5min，去上清，洗去培養(yǎng)基；
3、沉淀加入70ul 2*loading buffer，煮樣100度，25min；
4、離心6000rpm，3min；
5、去上 ...

2中洗去培養(yǎng)基是必須的步驟嗎？
3中25min是不是有點(diǎn)長(zhǎng)啊？
5中取上清點(diǎn)樣，是不是說(shuō)明沉淀中蛋白已經(jīng)溶到上清中了，這是什么原理？

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5樓2015-10-19 19:31:11

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