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xiaochen9002新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
蛋白純化不出來(lái)…… 已有6人參與
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手上有一個(gè)蛋白，大腸表達(dá)后鎳柱純化，得到了目的條帶，但是還有三條雜帶，估計(jì)是截短表達(dá)的蛋白。目前已經(jīng)用了好多方法去除雜帶，50KDa的超濾管，陰陽(yáng)離子交換柱以及分子篩，都沒(méi)分開(kāi)，不知道各位有什么好的方法沒(méi)？實(shí)在快瘋了，  電泳圖附上，紅色的是我要的條帶，靜候各位大牛的解答！效果圖.png |
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xiaochen9002
新蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2015-10-28 16:42:33
a86052
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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2樓2015-10-28 16:26:44
a86052
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4樓2015-10-28 16:56:46
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 通常使用超濾來(lái)純化蛋白是，其應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為61kDa，就可以選擇20kDa截留分子量的超濾管，所以用55kDa不行；陰陽(yáng)離子交換柱沒(méi)分開(kāi)，說(shuō)明純化的重組蛋白與雜蛋白PI接近。但是分子篩應(yīng)該是可以分得開(kāi)的，可能樓主的柱效不高，用標(biāo)準(zhǔn)試劑走著看一下，是否能達(dá)到應(yīng)用的要求。還有看看樓主的填料，可能選擇的不好,范圍太寬了。 |
5樓2015-10-28 16:59:39
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