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寧靜致遠(yuǎn)131金蟲 (正式寫手)
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[交流]
雙酶切鑒定
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| 轉(zhuǎn)DH5a后，菌液渾濁正常，菌液PCR鑒定顯示有目的基因條帶，然而雙酶切鑒定的時(shí)候?yàn)槭裁礇]有目的條帶，只有最上邊的條帶，重復(fù)幾次未果，想知道搖起來的菌是什么東西？ |
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mcxiaomu1023
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2樓2015-11-01 09:17:10
jiangronglu
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寧靜致遠(yuǎn)131: 金幣+3 2015-11-08 07:30:49
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寧靜致遠(yuǎn)131: 金幣+3 2015-11-08 07:30:49
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這個(gè)存在以下情況：1，轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌是否陽性，經(jīng)菌液pcr鑒定，陽性方可酶切。2，提取的質(zhì)粒是否有問題，譬如震蕩劇烈，斷裂之類的。3，酶切位點(diǎn)要合適確認(rèn)是否正確，此外還需考慮雙酶切兩個(gè)酶的酶切效率，若還是不行可以使用單酶切，分兩步進(jìn)行。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2015-11-01 10:16:31
rogerqiu
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這種情況說明沒有酶切開，可以直接提取質(zhì)粒送去測序，再比對就行了，畢竟是鑒定不需要執(zhí)著酶切一種辦法。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-11-01 11:36:34
5樓2015-11-01 11:44:16
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7樓2015-11-01 12:06:44
sonny
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你有陰性對照嗎，也不上張圖，誰知道你實(shí)驗(yàn)有沒有污染，PCR本生就易污染，造成假陽性，沒對照還討論什么 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2015-11-01 12:10:40
zhenwuhuang
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9樓2015-11-01 12:12:38
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這個(gè)是你選擇的酶切位點(diǎn)有問題，中間可能有錯(cuò)配。最后合適雙酶切的兩個(gè)酶是否為同位酶。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2015-11-01 13:26:49
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