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肉肉肉.鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于酵母表達真菌蛋白的一些困惑！ 已有1人參與
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各位大神好！本人最近在用ppic9k酵母表達載體表達一個真菌里面的蛋白。測序結(jié)果已經(jīng)顯示我想要的蛋白序列已經(jīng)成功連入了載體上，用MD平板也篩選到了his+的轉(zhuǎn)化子，但是進行誘導后用鎳柱純化蛋白卻沒有得到我的目的蛋白，看來是沒有成功表達！很是煩惱！現(xiàn)在懷疑是不是9k載體上面的AOX1啟動子被破壞了，所以設計了引物去測序，但是結(jié)果還沒有出來！很著急！然后看了篇文獻上面寫到作者在表達蛋白的時候去除了內(nèi)含子以及信號肽序列，我之前表達的時候先去ncbi找到目的蛋白的cds序列，然后去除了信號肽，提RNA后擴增出不包含信號肽的目的序列。然后進行后續(xù)操作。請問各位大神，是不是由于沒有考慮去除內(nèi)含子的原因，所以我的目的蛋白才沒有表達出來？跪謝！！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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9樓2015-11-16 09:21:16
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2樓2015-11-13 17:32:17
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4樓2015-11-13 18:52:36
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謝謝謝謝！我按照誘導手冊來誘導的，也誘導了兩遍，都沒成功。還有就是，請為你知道如何去除內(nèi)含子嗎？因為我就直接從ncbi上面找到了該蛋白的cds編碼區(qū)，里面也沒有說明哪些是內(nèi)含子，不知道有沒有什么工具或者方法可以去除內(nèi)含子？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2015-11-13 18:57:52
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