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[求助]
菌液測序結(jié)果全是非單克隆，求助分析 已有2人參與
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最近同時(shí)做了兩個(gè)植物內(nèi)生真菌基因庫的TA克隆（簡稱M和N吧），用的18t載，藍(lán)白斑篩選后，后送公司測序。 第一天M送了十幾個(gè)樣，除了部分公司說沒有培養(yǎng)成功，無法提取質(zhì)粒外，其他的基本都測序成功，且測出來的目的基因序列沒有問題。 第二天N送了15個(gè)樣，公司說5個(gè)培養(yǎng)失敗，2個(gè)測序失敗，7個(gè)非單克隆，1個(gè)測序成功，但是這個(gè)測序成功的序列我去載體后的基因序列壓根不是我想要的。 然后我對(duì)7個(gè)非單克隆的序列嘗試去載體，有幾個(gè)序列能找到插入點(diǎn)前端序列，但是找不到插入點(diǎn)后端序列；還有的插入點(diǎn)前后端序列都找不到；還有的前后端序列都能找到，但插入的序列不是目的序列。 同一批的處理，出現(xiàn)這種結(jié)果，不是很理解，我在送樣前每個(gè)都隨機(jī)篩選了七八個(gè)樣，跑了菌液pcr，看了條帶，都沒有問題。本人小白，也是剛剛接觸克隆測序?qū)嶒?yàn)，還請大家多多指教。 以下為幾張測序顯示非單克隆的峰圖： 截圖00.jpg 截圖01.jpg 截圖02.jpg |
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已經(jīng)有2人回復(fù)
3樓2015-11-22 21:52:08
2樓2015-11-22 20:31:24
4樓2015-11-23 09:14:26
5樓2015-11-23 09:34:35
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