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[求助]
菌液測(cè)序結(jié)果全是非單克隆，求助分析 已有2人參與
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最近同時(shí)做了兩個(gè)植物內(nèi)生真菌基因庫(kù)的TA克�。ê�(jiǎn)稱M和N吧），用的18t載，藍(lán)白斑篩選后，后送公司測(cè)序。 第一天M送了十幾個(gè)樣，除了部分公司說(shuō)沒(méi)有培養(yǎng)成功，無(wú)法提取質(zhì)粒外，其他的基本都測(cè)序成功，且測(cè)出來(lái)的目的基因序列沒(méi)有問(wèn)題。 第二天N送了15個(gè)樣，公司說(shuō)5個(gè)培養(yǎng)失敗，2個(gè)測(cè)序失敗，7個(gè)非單克隆，1個(gè)測(cè)序成功，但是這個(gè)測(cè)序成功的序列我去載體后的基因序列壓根不是我想要的。 然后我對(duì)7個(gè)非單克隆的序列嘗試去載體，有幾個(gè)序列能找到插入點(diǎn)前端序列，但是找不到插入點(diǎn)后端序列；還有的插入點(diǎn)前后端序列都找不到；還有的前后端序列都能找到，但插入的序列不是目的序列。 同一批的處理，出現(xiàn)這種結(jié)果，不是很理解，我在送樣前每個(gè)都隨機(jī)篩選了七八個(gè)樣，跑了菌液pcr，看了條帶，都沒(méi)有問(wèn)題。本人小白，也是剛剛接觸克隆測(cè)序?qū)嶒?yàn)，還請(qǐng)大家多多指教。 以下為幾張測(cè)序顯示非單克隆的峰圖： 截圖00.jpg 截圖01.jpg 截圖02.jpg |
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已經(jīng)有2人回復(fù)
4樓2015-11-23 09:14:26
2樓2015-11-22 20:31:24
3樓2015-11-22 21:52:08
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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"然后我對(duì)7個(gè)非單克隆的序列嘗試去載體，有幾個(gè)序列能找到插入點(diǎn)前端序列，但是找不到插入點(diǎn)后端序列；還有的插入點(diǎn)前后端序列都找不到；還有的前后端序列都能找到，但插入的序列不是目的序列"這段話我沒(méi)太看懂，是不是就是沒(méi)有找到插入目的序列的意思？ 菌p的引物不能用pcr特異性引物，會(huì)有假陽(yáng)性，用質(zhì)粒的測(cè)序引物，比如M13來(lái)菌p試試，如果拿不到目的條帶，就說(shuō)明你沒(méi)將目的序列連入質(zhì)粒。 |
5樓2015-11-23 09:34:35
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