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zxg200910銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
酶動(dòng)力學(xué)(enzyme kinetics)
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各位蟲(chóng)友，剛接觸酶學(xué)，很多疑問(wèn)，希望前輩們不吝賜教。 學(xué)到酶動(dòng)力學(xué)章節(jié)是，明白了米氏方程相關(guān)假設(shè)和推導(dǎo)，但動(dòng)力學(xué)都是考慮的，其他條件pH,T及酶濃度[E]一定，不同底物濃度[S]時(shí)(這里并且要求[S]遠(yuǎn)大于[E])的初速度，但是還是不知道這個(gè)“initial velocity”在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中如何測(cè)定和確定。本人理解應(yīng)該是體系單位時(shí)間產(chǎn)物的產(chǎn)生量或底物的消耗量（通常用摩爾濃度表示這個(gè)量）。但這個(gè)單位時(shí)間如何設(shè)定？看文獻(xiàn)，有的用15min內(nèi)的平均速率表示，有的用60min。不怎么理解？這個(gè)初速率不是應(yīng)該根據(jù)不同[s]體系，產(chǎn)物隨時(shí)間的變化曲線，根據(jù)初始線性那一段時(shí)間來(lái)計(jì)算嗎？ 求解，不勝感激！ 另外，望推薦一些經(jīng)典文章和參考資料，中英都可以。還有就就目前酶動(dòng)力學(xué)研究的最新技術(shù)和方法，理論也可以推薦。 |
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scofield111
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4樓2015-12-15 10:19:19
zxg200910
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5樓2015-12-15 18:09:52
yyy0305
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
zxg200910: 金幣+2, 太好啦，感謝分享和指導(dǎo) 2015-12-15 23:38:03
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
zxg200910: 金幣+2, 太好啦，感謝分享和指導(dǎo) 2015-12-15 23:38:03
| initial velocity指的是時(shí)間-產(chǎn)物反應(yīng)曲線最初的一段時(shí)間內(nèi)線性范圍內(nèi)的斜率，不同的酶和底物作用這個(gè)時(shí)間是不一樣的，樓主需要做動(dòng)力學(xué)曲線，即不同濃度的底物和酶反應(yīng)，每個(gè)30S或者1min進(jìn)行一次檢測(cè)，持續(xù)30min-60min,然后根據(jù)時(shí)間-產(chǎn)物的反應(yīng)曲線，確定在多長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)所有底物濃度點(diǎn)的曲線是線性的，該斜率即為initial velocity。附件的文檔有詳細(xì)酶Km測(cè)定的過(guò)程，實(shí)際操作，原理方面的推導(dǎo)都有 |
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- 附件 2 : KINETICS_OF_SINGLE-SUBSTRATE_ENZYME_REACTIONS.pdf
2015-12-15 21:54:53, 5.62 M
2015-12-15 22:02:32, 7.8 M
6樓2015-12-15 22:04:05
dxs123
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7樓2016-03-24 23:15:25
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