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夏夏shadow新蟲 (初入文壇)
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[求助]
用基因組dna擴增長度約為7.8kb的片段，一直擴不出來，求助 已有4人參與
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| 用過GC buffer，出現(xiàn)許多非特異性條帶，分成兩段擴過，后面一段擴出來了，前面的一段擴不出來。由于是要構(gòu)建載體用的，已經(jīng)加了酶切識別的引物接頭，擴了好多天了，試過兩步法：95° 5min，95° 40s，68° 8 min 30循環(huán)，72° 10min，25°保存。也試過梯度pcr，將退火溫度每一個循環(huán)提高0.1度，結(jié)果以前有的非特異性條帶都沒有了，十分干凈的沒東西。求大神指導(dǎo) |
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uulovelyuu
至尊木蟲 (著名寫手)
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2樓2015-12-21 11:06:40
peptide3986
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2016-01-11 17:17:41
4樓2016-01-11 19:53:00
潘潘0227
銅蟲 (小有名氣)
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5樓2016-01-11 21:41:12
原來，是這樣
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6樓2016-01-11 22:51:02
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7樓2016-01-12 10:31:56
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