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夏夏shadow新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用基因組dna擴(kuò)增長(zhǎng)度約為7.8kb的片段，一直擴(kuò)不出來(lái)，求助 已有4人參與
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| 用過(guò)GC buffer，出現(xiàn)許多非特異性條帶，分成兩段擴(kuò)過(guò)，后面一段擴(kuò)出來(lái)了，前面的一段擴(kuò)不出來(lái)。由于是要構(gòu)建載體用的，已經(jīng)加了酶切識(shí)別的引物接頭，擴(kuò)了好多天了，試過(guò)兩步法：95° 5min，95° 40s，68° 8 min 30循環(huán)，72° 10min，25°保存。也試過(guò)梯度pcr，將退火溫度每一個(gè)循環(huán)提高0.1度，結(jié)果以前有的非特異性條帶都沒(méi)有了，十分干凈的沒(méi)東西。求大神指導(dǎo) |
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原來(lái)，是這樣
金蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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試一試takara的LA taq酶，專門擴(kuò)長(zhǎng)片段，退火延伸都是一個(gè)溫度，不需要你之前那么麻煩。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2016-01-11 22:51:02
uulovelyuu
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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2樓2015-12-21 11:06:40
peptide3986
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2016-01-11 17:17:41
4樓2016-01-11 19:53:00
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