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[求助]
用基因組dna擴增長度約為7.8kb的片段,一直擴不出來,求助 已有4人參與
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| 用過GC buffer,出現許多非特異性條帶,分成兩段擴過,后面一段擴出來了,前面的一段擴不出來。由于是要構建載體用的,已經加了酶切識別的引物接頭,擴了好多天了,試過兩步法:95° 5min,95° 40s,68° 8 min 30循環(huán),72° 10min,25°保存。也試過梯度pcr,將退火溫度每一個循環(huán)提高0.1度,結果以前有的非特異性條帶都沒有了,十分干凈的沒東西。求大神指導 |
至尊木蟲 (著名寫手)
銅蟲 (初入文壇)
銅蟲 (小有名氣)
金蟲 (小有名氣)
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