 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1646 | 回復(fù): 4 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
Doge Ku新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
【求助】菌液Pcr 陽性率很低，載體雙酶切后不徹底？ 已有2人參與
|
|
研一小菜鳥一枚。上個(gè)月帶我的老師讓我構(gòu)建7個(gè)載體�，F(xiàn)在已經(jīng)構(gòu)建出6個(gè)，剩下一個(gè)做了幾次都沒做出來。目的片段大小1.3Kb，載體為5Kb。用的是neb的EcorI和EcorV雙酶切，兩個(gè)酶切位點(diǎn)之間間隔大約750Kb。目的片段用的是neb BsmBI和EcorV酶切。載體酶切體系試過20微升和50微升，載體量分辨是1微克和2微克。目的片段全部酶切，用的是50微升體系。跑膠回收時(shí)，能看一條5Kb和一條750bp的條帶。連接用的是neb的T4,10微升體系，16度過夜。目的片段的濃度是20納克每微升，載體也是。兩者摩爾比為1:8。 結(jié)合前面6次陽性率很低的經(jīng)驗(yàn)，我在連接時(shí)做了一個(gè)對(duì)照，用已經(jīng)回收的雙酶切的載體不加目的片段連接，之后做轉(zhuǎn)化。發(fā)現(xiàn)對(duì)照組長滿了菌。酶切這個(gè)步驟已經(jīng)重復(fù)兩次了，但依然如此。我試著調(diào)了16個(gè)菌落做菌液pcr，但全部為陰性。請(qǐng)問各位大牛怎么看？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有64人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 【求助】T載體雙酶切基因連接PET32a后，菌液PCR為什么有多條帶
已經(jīng)有40人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化PCR鑒定，沒有陽性菌落
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】求助PCR擴(kuò)增
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】革蘭氏陽性菌PCR問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】除了菌液PCR測(cè)序外還有什么辦法鑒定建構(gòu)好的載體？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR結(jié)果（望高手進(jìn)來拆招……本人第一次做TA克隆，么經(jīng)驗(yàn)）
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR電泳結(jié)果疑問
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR鑒定陽性克隆時(shí)，總出現(xiàn)非特異性條帶
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌菌液，如何再擴(kuò)增？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR鑒定陽性克隆時(shí)，總出現(xiàn)CK
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】JM109菌液PCR時(shí)間
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】濃縮PCR產(chǎn)物所用的醋酸鈉的濃度和PH值是多少
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教關(guān)于PCR
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于農(nóng)桿菌菌液PCR
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR結(jié)束，肉眼直接看到條帶可能不？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】嚴(yán)重求助~回收檢測(cè)的片段大小和菌液PCR檢測(cè)的結(jié)果差異大。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR的經(jīng)驗(yàn)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】克隆轉(zhuǎn)化后菌液PCR無條帶
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】RACE產(chǎn)物克隆菌液怎么檢測(cè)
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液測(cè)序問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】細(xì)菌基因組為模板做pcr的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)菌液PCR的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR，求助。
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】求助一個(gè)很奇怪的PCR現(xiàn)象
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR和酶切的結(jié)果不符
已經(jīng)有18人回復(fù)
fengjunchen
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 743.6
- 紅花: 2
- 帖子: 136
- 在線: 77小時(shí)
- 蟲號(hào): 3548432
- 注冊(cè): 2014-11-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
5樓2016-04-29 16:48:52
kingjazz23
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 896.1
- 散金: 20
- 帖子: 261
- 在線: 83.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2581130
- 注冊(cè): 2013-08-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
|
你好 可不可以先告訴我構(gòu)建的完整過程 我也是做這方面的 現(xiàn)在做到了搖菌 之前做了個(gè)菌落PCR 搖完菌打算提質(zhì)粒測(cè)序做酶切 想問問后面的步驟是什么 就是我做完酶切后還要做什么步驟 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2016-04-13 15:54:58
showhand
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10.8
- 帖子: 34
- 在線: 12.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 4324770
- 注冊(cè): 2015-12-31
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
3樓2016-04-28 09:18:06
bigbang颯
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 851.5
- 帖子: 12
- 在線: 14.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 2470044
- 注冊(cè): 2013-05-18
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2016-04-29 09:35:42
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 調(diào)劑310 +12 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 環(huán)境工程 085701，267求調(diào)劑 +6 | minht 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070305高分子化學(xué)與物理 304分求調(diào)劑 +12 | c297914 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +13 | zhn03 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑考研 +3 | 王杰一 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑 +4 | IceGuo 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +7 | 宋明欣 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分求調(diào)劑 +8 | 你好明天你好 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +5 | Ong3 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | hanamiko 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290分調(diào)劑求助 +3 | 吉祥止止陳 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4 | 周56 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 324 +4 | Promise-jyl 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達(dá)問津 2026-03-23 | 5/250 |
|