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銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的滑膜細(xì)胞提取蛋白后做western blot，就是不出條帶。求助大神。已有1人參與

1.蛋白量足夠。蛋白濃度每個(gè)上樣300ug
2.膠片顯影以后，就是沒(méi)有條帶。顯影后的pvdf膜用考馬斯亮藍(lán)染色后，有很明顯的蛋白條帶。
3.對(duì)應(yīng)marker轉(zhuǎn)到膜上，顏色還很鮮艷。

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慎獨(dú)。

1樓 2015-12-22 14:06:47

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銅蟲(chóng) (小有名氣)

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2樓: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 10:51:38
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本身量表達(dá)很少

您看一下圖，膜上的maker還是比較明顯的，但是立春紅染色后并沒(méi)有條帶。對(duì)應(yīng)分子量的marker轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)了，可是不知道為什么就沒(méi)有蛋白呢。謝謝你。

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慎獨(dú)。

4樓2015-12-29 14:32:31

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yang0071

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2樓2015-12-23 10:51:38

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2樓: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 10:51:38
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蛋白檢測(cè)濃度后，然后wb每孔上樣60ug。我上樣上了3組，每組帶一個(gè)marker。跑完，組1用考馬斯亮藍(lán)染色，如圖。然后組2組3的膠用來(lái)轉(zhuǎn)膜，然后組2的膜用立春紅染色，如圖，pvdf膜上是有marker的，由于光線問(wèn)題，不是很明顯。組三的用來(lái)顯影，目前還沒(méi)出結(jié)果，顯影結(jié)束跟你討論，謝謝。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的滑膜細(xì)胞提取蛋白后做western blot，就是不出條帶。求助大神。

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類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的滑膜細(xì)胞提取蛋白后做western blot，就是不出條帶。求助大神。-1

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慎獨(dú)。

3樓2015-12-29 14:30:23

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濕轉(zhuǎn)。條件：恒流300mA，電壓在70v上下，17min。目的蛋白分子量48。謝謝你。

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5樓2015-12-29 15:13:52

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