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求大神~啟動子研究,gus表達(dá),用的pbi121 已有1人參與
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大家好,本人準(zhǔn)備做不同材料的同一個基因啟動子研究。序列我已知道,存在差異。所以要比較兩個材料的啟動子是不是活性不一樣。目前手頭可以用的載體是pbi 121,15000bp左右,打算把自己的啟動子置換掉載體gus報告基因前面的35s啟動子。我目前有兩個問題不清楚。求大神們指導(dǎo)。1. 使用plantcare預(yù)測時,有+-鏈的結(jié)果,我是考慮正義鏈就可以了還是正義鏈反義鏈都需要看???我問了我身邊幾個做過的,他們也沒有說清。2.構(gòu)建載體時看論壇有人說考慮移碼突變。我是這么想的,克隆時F引物只要不打斷前面的元件,后面的R引物剛好設(shè)計到我的目的基因ATg前面的一個堿基,這樣子啟動子再整到121載體上,后面的gus應(yīng)該不會導(dǎo)致移碼突變了對嗎?我的啟動子有atg,但是在網(wǎng)上查只要啟動子有轉(zhuǎn)錄起始位點,里面的atg不會作為翻譯起始位點的,所以就沒有考慮它們和gus前的堿基是不是3的倍數(shù)。這樣子想對嗎? [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
蟲友問答-分子生物 |
金蟲 (正式寫手)
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1. 看正義鏈。 2. 不存在移碼突變的問題。 3. 確定你所用啟動子對應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(一般是5'UTR頂端),對該轉(zhuǎn)錄起始位點開始轉(zhuǎn)錄包含GUS的融合mRNA進(jìn)行ORF分析,檢測是否影響GUS的翻譯。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
鐵蟲 (初入文壇)
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你好,我是南京林業(yè)大學(xué)的,我們實驗室的pbi121找不到了,方便的話你能給我點嗎?買公司的太貴,我們質(zhì)粒都是找別人要的,不會讓你白辛苦的,你看可以嗎? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

新蟲 (小有名氣)

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