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[求助]
求大神～啟動子研究，gus表達，用的pbi121 已有1人參與
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大家好，本人準備做不同材料的同一個基因啟動子研究。序列我已知道，存在差異。所以要比較兩個材料的啟動子是不是活性不一樣。目前手頭可以用的載體是pbi 121，15000bp左右，打算把自己的啟動子置換掉載體gus報告基因前面的35s啟動子。我目前有兩個問題不清楚。求大神們指導。1. 使用plantcare預測時，有+-鏈的結果，我是考慮正義鏈就可以了還是正義鏈反義鏈都需要看？？？我問了我身邊幾個做過的，他們也沒有說清。2.構建載體時看論壇有人說考慮移碼突變。我是這么想的，克隆時F引物只要不打斷前面的元件，后面的R引物剛好設計到我的目的基因ATg前面的一個堿基，這樣子啟動子再整到121載體上，后面的gus應該不會導致移碼突變了對嗎？我的啟動子有atg，但是在網上查只要啟動子有轉錄起始位點，里面的atg不會作為翻譯起始位點的，所以就沒有考慮它們和gus前的堿基是不是3的倍數。這樣子想對嗎？ [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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 蟲友問答-分子生物 |
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送紅花一朵 
7樓2016-12-23 02:30:20
xiangbchen
金蟲 (正式寫手)
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- 注冊: 2011-11-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物學
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數 +1
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1. 看正義鏈。 2. 不存在移碼突變的問題。 3. 確定你所用啟動子對應基因的轉錄起始位點（一般是5＇UTR頂端），對該轉錄起始位點開始轉錄包含GUS的融合mRNA進行ORF分析，檢測是否影響GUS的翻譯。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-01-18 13:12:48
gongming2199
鐵蟲 (初入文壇)
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- 注冊: 2011-06-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 林木遺傳育種學
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你好，我是南京林業(yè)大學的，我們實驗室的pbi121找不到了，方便的話你能給我點嗎？買公司的太貴，我們質粒都是找別人要的，不會讓你白辛苦的，你看可以嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2016-09-08 06:50:09
浩二
新蟲 (小有名氣)
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- 帖子: 141
- 在線: 13.3小時
- 蟲號: 3392659
- 注冊: 2014-09-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 病原真菌學
4樓2016-12-22 18:40:03
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