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[求助]
求大神～啟動(dòng)子研究，gus表達(dá)，用的pbi121 已有1人參與
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大家好，本人準(zhǔn)備做不同材料的同一個(gè)基因啟動(dòng)子研究。序列我已知道，存在差異。所以要比較兩個(gè)材料的啟動(dòng)子是不是活性不一樣。目前手頭可以用的載體是pbi 121，15000bp左右，打算把自己的啟動(dòng)子置換掉載體gus報(bào)告基因前面的35s啟動(dòng)子。我目前有兩個(gè)問(wèn)題不清楚。求大神們指導(dǎo)。1. 使用plantcare預(yù)測(cè)時(shí)，有+-鏈的結(jié)果，我是考慮正義鏈就可以了還是正義鏈反義鏈都需要看？？？我問(wèn)了我身邊幾個(gè)做過(guò)的，他們也沒(méi)有說(shuō)清。2.構(gòu)建載體時(shí)看論壇有人說(shuō)考慮移碼突變。我是這么想的，克隆時(shí)F引物只要不打斷前面的元件，后面的R引物剛好設(shè)計(jì)到我的目的基因ATg前面的一個(gè)堿基，這樣子啟動(dòng)子再整到121載體上，后面的gus應(yīng)該不會(huì)導(dǎo)致移碼突變了對(duì)嗎？我的啟動(dòng)子有atg，但是在網(wǎng)上查只要啟動(dòng)子有轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，里面的atg不會(huì)作為翻譯起始位點(diǎn)的，所以就沒(méi)有考慮它們和gus前的堿基是不是3的倍數(shù)。這樣子想對(duì)嗎？ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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4樓2016-12-22 18:40:03
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1. 看正義鏈。 2. 不存在移碼突變的問(wèn)題。 3. 確定你所用啟動(dòng)子對(duì)應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（一般是5＇UTR頂端），對(duì)該轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)開始轉(zhuǎn)錄包含GUS的融合mRNA進(jìn)行ORF分析，檢測(cè)是否影響GUS的翻譯。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-01-18 13:12:48
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你好，我是南京林業(yè)大學(xué)的，我們實(shí)驗(yàn)室的pbi121找不到了，方便的話你能給我點(diǎn)嗎？買公司的太貴，我們質(zhì)粒都是找別人要的，不會(huì)讓你白辛苦的，你看可以嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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蟲卜19883樓2016-09-08 06:50:09
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5樓2016-12-22 18:41:32
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