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ch854355011新蟲 (初入文壇)
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[求助]
SDS-PAGE蛋白表達(dá) 已有7人參與
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最近原核表達(dá)SDS-PAGE一直沒結(jié)果。也不知道出現(xiàn)了什么問題。原核表達(dá)載體是pet28a，菌BL21，培養(yǎng)基LB，經(jīng)菌液pcr，酶切和測(cè)序，表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，誘導(dǎo)濃度1mmol/L，取樣0-5h，但是每次跑出來(lái)的條帶都一樣，沒有所需目的條帶的表達(dá)，目的基因在27或33kd，跑出來(lái)的圖片每次都沒表達(dá)，并且條帶深淺度一樣。求助給點(diǎn)意見。 `~~~4[GB2GK@Q)LEVF_[JU0.png |
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wangpeng8
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3樓2016-01-26 19:54:22
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2樓2016-01-26 19:53:25
7樓2016-01-27 18:40:07
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iptg是在od0.4的時(shí)候加的嗎，1mM會(huì)不會(huì)有點(diǎn)高，我們實(shí)驗(yàn)室都用的0.1-0.5 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-03-11 22:59:27
原海亮
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你這個(gè)是全細(xì)胞加熱后跑的么，還是細(xì)胞超聲后跑的上清？建議沉淀也跑一下，看看目的蛋白是不是在沉淀包涵體中。另外不知道你誘導(dǎo)溫度，一般低溫過夜誘導(dǎo)較好，可以做誘導(dǎo)溫度優(yōu)化。還有iptg誘導(dǎo)濃度可以適當(dāng)降低些 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-01-26 20:55:00
tj113578888
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5樓2016-01-26 21:10:19
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6樓2016-01-26 22:03:47
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8樓2016-01-30 23:39:57
9樓2016-02-20 15:49:25
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