 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3079 | 回復(fù): 6 | |||||
hijiwei新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
SDS-page 原核表達(dá)蛋白 電泳條帶彌散 已有6人參與
|
|
求助，最近做了N塊膠，有15%的分離膠，也有5%-20%的梯度膠跑出來的蛋白不成條帶？？以前不這樣��？ 菌液IPTG誘導(dǎo)完，離心沉淀菌體，PBS重懸，加4XSDS上樣緩沖液（終濃度為1X）煮沸5min，13000rpm離心12min，在4℃保存，第二天電泳。 ![\"SDS-page](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2013/1006/w158h1911237_1381061914_706.jpg#opennewwindow\")  ![\"SDS-page](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2013/1006/w102h1911237_1381061927_393.jpg#opennewwindow\") |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實驗經(jīng)驗 | 核酸生物學(xué)實驗經(jīng)驗 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有263人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- SDS-PAGE電泳圖條帶分析
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 原核表達(dá)和SDS-PAGE
已經(jīng)有9人回復(fù)
- SDS-page電泳蛋白樣的處理
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于western blot SDS電泳時溴芬蘭線彌散的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- SDS-PAGE蛋白電泳同一蛋白不同loading buffer條帶不一樣
已經(jīng)有7人回復(fù)
- sds-page電泳時marker少跑出一條帶是怎么回事？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- SDS-Page電泳沒有條帶，都是黑黑的一片，請教原因
已經(jīng)有9人回復(fù)
- SDS-PAGE什么條帶都沒有
已經(jīng)有10人回復(fù)
- SDS-PAGE 電泳蛋白分子量飄移
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 請教為啥SDS-PAGE電泳條帶彌散？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- SDS-PAGE蛋白電泳
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 原核表達(dá)中SDS-PAGE上樣量如何確定？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- SDS-PAGE后面幾條帶彌散求助
已經(jīng)有15人回復(fù)
- SDS-PAGE 我的樣品沒有跑出條帶，請教高手！謝謝！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳，菌液總蛋白，染色后顯示的是彌散的
已經(jīng)有5人回復(fù)
- SDS-PAGE蛋白電泳條帶問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助】SDS-PAGE電泳上樣量
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE蛋白電泳的蛋白條帶回收
已經(jīng)有8人回復(fù)
xiaoche
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 102.2
- 帖子: 69
- 在線: 8.5小時
- 蟲號: 366525
- 注冊: 2007-05-09
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
2樓2013-10-06 23:07:08
藍(lán)冰天山
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 278.1
- 散金: 30
- 帖子: 12
- 在線: 2.3小時
- 蟲號: 1547810
- 注冊: 2011-12-22
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
3樓2013-10-07 20:47:15
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+5, 鼓勵交流 2013-10-07 21:43:40
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+5, 鼓勵交流 2013-10-07 21:43:40
|
SDS電泳帶彌散和拖尾的原因和改進(jìn)措施(2013-10-7) 1.原因一：上樣量過多，應(yīng)該減少上樣量。對策：加樣體積根據(jù)樣品濃度和凝膠厚度靈活掌握。一般上樣體積為10-15µL（即2-10µg蛋白質(zhì)）。如果樣品很稀上樣量可以達(dá)到100µL。 2.原因二：樣品溶解不完全。 對策： （1）樣品應(yīng)該充分溶解：保持各種蛋白質(zhì)樣品和Marker在上樣前能夠充分溶解，上樣前最好離心一下，實在溶解不掉的顆粒就去掉。 (2)可以根據(jù)分子量標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)試劑盒的要求加入樣品溶解液；如果是自行配置標(biāo)準(zhǔn)和未知樣品，按照0.5-1.0mg/L樣品溶解液。溶解后，將其轉(zhuǎn)移至Eppendorf管，蓋上蓋子（可以在蓋子處加上卡子）后在110度沸水中水浴加熱3分鐘（可以在薄泡沫塑料板上鉆出幾個與Eppendorf管直徑形同的圓洞，Eppendorf管放下去直到蓋子邊緣約束不能再往下為止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管體大部分的那一面放入沸水浴鍋中，薄泡沫塑料板自然飄在沸水表面，便于取用和加熱，也可避免沸水濺起�？梢砸慌鷮τ诙鄠�Eppendorf管進(jìn)行不同時間的沸水浴。不要把Eppendorf管扔進(jìn)沸水浴鍋中，蓋子可能會被沖開），而后在室溫下冷卻待用。如果較長時間不用，則將樣品放入零下20度冰箱中儲存，需用時在取出后使用前在110度沸水中加熱3分鐘室溫冷卻后再上樣，以去掉樣品蛋白質(zhì)中的亞穩(wěn)態(tài)聚合體。 （3）改變樣品緩沖溶液使得樣品能夠充分溶解，SDS 用量要充分。 樓主的圖看不見，更具樓主的情況加上一條： 3.原因三.原核細(xì)胞的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)生了降解或者提前終止了翻譯。 |
4樓2013-10-07 21:20:59
5樓2014-06-20 22:25:55
dongmings
木蟲之王 (文學(xué)泰斗)
- 應(yīng)助: 20 (小學(xué)生)
- 金幣: 72971.6
- 紅花: 6
- 帖子: 57340
- 在線: 987.9小時
- 蟲號: 351746
- 注冊: 2007-04-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 天然藥物化學(xué)
6樓2014-11-22 15:22:40
7樓2014-11-22 15:33:43
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 hijiwei 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +6 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +6 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學(xué)化材專業(yè)26屆碩士博士申請 +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +6 | Iuruoh 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過A區(qū)線 +6 | 步川酷紫123 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +3 | miaodesi 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 270求調(diào)劑 085600材料與化工專碩 +3 | YXCT 2026-03-11 | 3/150 |
|