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[求助]
小鼠脾細胞Th流式CD4染色極少怎么破… 已有2人參與
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感覺做Th流式CD4+一直非常少，求大神講解，下面是大概的流程… 淋巴細胞分離液處理的Balb/c正常小鼠脾細胞，大概1*10^6／ml，24孔板每孔1ml做刺激: PMA 50ng／ml, Ionomycin 1ug／ml, Golgistop 照BD說明書加的，刺激時間一般6~8h。第二天收了以后胞外染色、固定穿透、胞內染色。固定穿透用的是ebioscience的permeabilization buffer和fixation/ permeabilizaton concentrate，流式抗體都是ebioscience的(CD4,IL4, IFNr)。重復了幾次下來都存在CD4+極少甚至染不上(0.5%以下，很多0.1%不到)。 請問這種染色效率是否正常？看到過一種說法是刺激物會引起CD4的表達量減少和內吞，這種情況在實驗過程里應該怎么避免？CD3+CD8-作為CD4+的替代標記這種做法在小鼠細胞實驗里是否能夠得到認可？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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徐州往事
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應助: 2 (幼兒園)
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- 在線: 108.6小時
- 蟲號: 900173
- 注冊: 2009-11-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 炎癥、感染與免疫
【答案】應助回帖
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PMA刺激4小時以后CD4數量就開始下降，過夜培養(yǎng)數量會降的更低。如果必須過夜培養(yǎng)，可以利用CD3CD8反向射門來分析你所需要的細胞群。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-02-04 00:46:23
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3樓2016-03-03 21:22:55
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4樓2016-03-03 21:25:24
5樓2016-04-01 13:58:13
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最近發(fā)現我這套溶液是做Treg核染的，做胞質染有另外的，或者直接多聚甲醛。每次做都是Th,Treg一起用的這套溶液，也不知道是不是這個原因。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-04-01 14:01:06
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7樓2016-04-01 22:08:52
8樓2016-04-01 23:34:38
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