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[求助]
小鼠脾細(xì)胞Th流式CD4染色極少怎么破… 已有2人參與
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感覺(jué)做Th流式CD4+一直非常少，求大神講解，下面是大概的流程… 淋巴細(xì)胞分離液處理的Balb/c正常小鼠脾細(xì)胞，大概1*10^6／ml，24孔板每孔1ml做刺激: PMA 50ng／ml, Ionomycin 1ug／ml, Golgistop 照BD說(shuō)明書加的，刺激時(shí)間一般6~8h。第二天收了以后胞外染色、固定穿透、胞內(nèi)染色。固定穿透用的是ebioscience的permeabilization buffer和fixation/ permeabilizaton concentrate，流式抗體都是ebioscience的(CD4,IL4, IFNr)。重復(fù)了幾次下來(lái)都存在CD4+極少甚至染不上(0.5%以下，很多0.1%不到)。 請(qǐng)問(wèn)這種染色效率是否正常？看到過(guò)一種說(shuō)法是刺激物會(huì)引起CD4的表達(dá)量減少和內(nèi)吞，這種情況在實(shí)驗(yàn)過(guò)程里應(yīng)該怎么避免？CD3+CD8-作為CD4+的替代標(biāo)記這種做法在小鼠細(xì)胞實(shí)驗(yàn)里是否能夠得到認(rèn)可？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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徐州往事
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 6069.1
- 紅花: 5
- 帖子: 390
- 在線: 108.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 900173
- 注冊(cè): 2009-11-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 炎癥、感染與免疫
【答案】應(yīng)助回帖
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PMA刺激4小時(shí)以后CD4數(shù)量就開(kāi)始下降，過(guò)夜培養(yǎng)數(shù)量會(huì)降的更低。如果必須過(guò)夜培養(yǎng)，可以利用CD3CD8反向射門來(lái)分析你所需要的細(xì)胞群。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2016-02-04 00:46:23
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2016-03-03 21:22:55
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2016-03-03 21:25:24
5樓2016-04-01 13:58:13
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最近發(fā)現(xiàn)我這套溶液是做Treg核染的，做胞質(zhì)染有另外的，或者直接多聚甲醛。每次做都是Th,Treg一起用的這套溶液，也不知道是不是這個(gè)原因。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2016-04-01 14:01:06
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
7樓2016-04-01 22:08:52
8樓2016-04-01 23:34:38
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