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王繼樓馬新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
連接轉(zhuǎn)化問(wèn)題，求教。 已有2人參與
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我這兩天在做連接轉(zhuǎn)化，有兩個(gè)對(duì)照組，一個(gè)是只加質(zhì)粒，一個(gè)是只加目的基因。連接反應(yīng)是平末端連接。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只加質(zhì)粒的對(duì)照組菌落只有兩三個(gè)，但是只加目的基因的對(duì)照組菌落卻有十幾二十個(gè)，實(shí)驗(yàn)組有50-60個(gè)。 為什么只加目的基因的對(duì)照組長(zhǎng)得這么多，不科學(xué)��！我板子是Amp，按只加質(zhì)粒對(duì)照組來(lái)看，amp是沒(méi)有失效的。個(gè)人認(rèn)為目的基因也沒(méi)有污染，因?yàn)槭菑钠渌|(zhì)粒上酶切膠回收來(lái)的，跑膠看過(guò)很單一。 這是怎么回事？！有大神知道嗎？ |
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2樓2016-02-02 08:56:19
yzc937168
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3樓2016-02-02 09:56:09
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4樓2016-02-03 09:16:05
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5樓2016-02-04 21:03:59
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6樓2016-02-04 21:04:15
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7樓2016-02-04 21:04:56
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1）我只是就我目前已有的幾個(gè)分組進(jìn)行的推測(cè)，我已經(jīng)補(bǔ)了一個(gè)只有DH5α的轉(zhuǎn)化板子，沒(méi)有菌落，這說(shuō)明AMP確實(shí)煤油失效。 2）我已經(jīng)挑了24個(gè)克隆，進(jìn)行了酶切鑒定，有四個(gè)是符合我片段預(yù)期的。我準(zhǔn)備大提一下進(jìn)行PCR檢測(cè)。 3）連接比例是嚴(yán)格按照方程來(lái)的，由于需要上電泳圖太麻煩，我就沒(méi)提這一部分。 不過(guò)目前我有一個(gè)新問(wèn)題，不知道仁兄可否解答一下，為什么我挑的24克隆在amp液體LB培養(yǎng)基中過(guò)夜培養(yǎng)，相同時(shí)間菌液密度不一致？ |
8樓2016-02-04 21:09:09
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9樓2016-02-04 21:09:23
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10樓2016-02-04 21:09:34
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