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王希lily新蟲 (初入文壇)
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[求助]
誰做過IMPACT-TWIN 蛋白純化呀?緊急求助 已有2人參與
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| 本人做原核表達(dá)已有一年多了,用的表達(dá)載體是PTWIN1,好不容易表達(dá)了且表達(dá)在上清,但是在純化上又卡住了。純化是買的NEB公司的幾丁質(zhì)珠,按照說明書進(jìn)行的操作:將5ml chitin beads倒入2.5×10 cm柱中,10個柱床體積的緩沖液Buffer B1(20mM Tris-Hcl 8.5,500mM Nacl,1mM EDTA)進(jìn)行柱平衡;將澄清的細(xì)胞粗提物緩慢加入Chitin柱,流速約為0.5-1.0 ml/min;用100 mL的緩沖液Buffer B1徹底洗柱;用3倍柱床體積Buffer B2(20mM Tris-Hcl 6.5,500mM Nacl,1mM EDTA)洗柱,4℃放置48h;48h后用3倍柱床體積的Buffer B1,將目的蛋白洗脫收集,但是收集時儀器上沒有峰值。上樣后的穿出液在SDS-PAGE上證明已經(jīng)掛上了柱子,但是最后的洗脫液在SDS-PAGE上什么也沒有。請問哪位大俠做此類純化或者用過幾丁質(zhì)株呢?給點(diǎn)意見或者建議吧,本人已做了2個月了,一直純化不出來,緊急求助各位大神。 |
專家顧問 (正式寫手)
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專家經(jīng)驗(yàn): +21 |

新蟲 (初入文壇)
鐵蟲 (小有名氣)

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