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王希lily新蟲 (初入文壇)
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[求助]
誰(shuí)做過(guò)IMPACT-TWIN 蛋白純化呀？緊急求助 已有2人參與
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| 本人做原核表達(dá)已有一年多了，用的表達(dá)載體是PTWIN1，好不容易表達(dá)了且表達(dá)在上清，但是在純化上又卡住了。純化是買的NEB公司的幾丁質(zhì)珠，按照說(shuō)明書進(jìn)行的操作：將5ml chitin beads倒入2.5×10 cm柱中，10個(gè)柱床體積的緩沖液Buffer B1（20mM Tris-Hcl 8.5,500mM Nacl,1mM EDTA）進(jìn)行柱平衡；將澄清的細(xì)胞粗提物緩慢加入Chitin柱，流速約為0.5-1.0 ml/min；用100 mL的緩沖液Buffer B1徹底洗柱；用3倍柱床體積Buffer B2（20mM Tris-Hcl 6.5,500mM Nacl,1mM EDTA）洗柱，4℃放置48h；48h后用3倍柱床體積的Buffer B1，將目的蛋白洗脫收集，但是收集時(shí)儀器上沒(méi)有峰值。上樣后的穿出液在SDS-PAGE上證明已經(jīng)掛上了柱子，但是最后的洗脫液在SDS-PAGE上什么也沒(méi)有。請(qǐng)問(wèn)哪位大俠做此類純化或者用過(guò)幾丁質(zhì)株呢？給點(diǎn)意見或者建議吧，本人已做了2個(gè)月了，一直純化不出來(lái)，緊急求助各位大神。 |
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5樓2016-06-04 14:04:46
pennchem
專家顧問(wèn) (正式寫手)
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專家經(jīng)驗(yàn): +21 - MolEPI: 1
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
2樓2016-02-19 15:41:20
王希lily
新蟲 (初入文壇)
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- 帖子: 36
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- 性別: MM
- 專業(yè): 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)
3樓2016-02-19 15:54:48
protein780
鐵蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
4樓2016-05-04 21:35:48
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