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王希lily新蟲 (初入文壇)
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[求助]
誰做過IMPACT-TWIN 蛋白純化呀？緊急求助 已有2人參與
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| 本人做原核表達已有一年多了，用的表達載體是PTWIN1，好不容易表達了且表達在上清，但是在純化上又卡住了。純化是買的NEB公司的幾丁質(zhì)珠，按照說明書進行的操作：將5ml chitin beads倒入2.5×10 cm柱中，10個柱床體積的緩沖液Buffer B1（20mM Tris-Hcl 8.5,500mM Nacl,1mM EDTA）進行柱平衡；將澄清的細胞粗提物緩慢加入Chitin柱，流速約為0.5-1.0 ml/min；用100 mL的緩沖液Buffer B1徹底洗柱；用3倍柱床體積Buffer B2（20mM Tris-Hcl 6.5,500mM Nacl,1mM EDTA）洗柱，4℃放置48h；48h后用3倍柱床體積的Buffer B1，將目的蛋白洗脫收集，但是收集時儀器上沒有峰值。上樣后的穿出液在SDS-PAGE上證明已經(jīng)掛上了柱子，但是最后的洗脫液在SDS-PAGE上什么也沒有。請問哪位大俠做此類純化或者用過幾丁質(zhì)株呢？給點意見或者建議吧，本人已做了2個月了，一直純化不出來，緊急求助各位大神。 |
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已經(jīng)有17人回復
王希lily
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 基礎獸醫(yī)學
3樓2016-02-19 15:54:48
pennchem
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- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
- 管轄: 生物科學
2樓2016-02-19 15:41:20
protein780
鐵蟲 (小有名氣)
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- 注冊: 2012-09-23
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學
4樓2016-05-04 21:35:48
5樓2016-06-04 14:04:46
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