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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 藥學 » 藥代動力學 » 請教血漿蛋白結合率的問題
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[求助]
請教血漿蛋白結合率的問題 已有1人參與
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本人已經(jīng)測定完了血藥濃度，但是還想做此血漿蛋白結合率的測定，許多地方都不懂，查了文獻關于具體步驟少之又少，實在不解，望專業(yè)人士不吝賜教。 1關于具體膜的選擇，完全不懂 2具體的實驗步驟 3關于方法的驗證問題，是不是無論采用何種方法都要驗證，比如我已經(jīng)建立了血藥濃度的HPLC的方法，但是如果要是在檢測經(jīng)過半透膜濾過的血漿樣品，是不是會有緩沖液的影響（我的流動相中沒有磷酸緩沖液）是不是要重新建立一套檢測方法，然后再做方法學的驗證，最后在測定濃度。 |
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mechelle_113
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【答案】應助回帖
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林曉蓓: 金幣+40, ★★★很有幫助 2014-04-04 09:02:06
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我用的是超濾法，買的是密理博的超濾管，一般打電話問有沒有做血漿蛋白結合率用的超濾管的話銷售會不清楚，因為超濾管主要是用作濃縮蛋白的。所以你就知道是濃縮蛋白的超濾管就可以了。一般有10K，30K兩種，膜的話就只有一種，如果你的藥物分子量比較大的話建議使用30K，兩種孔徑的差別一在于分子量，二在于離心效率，10K離下來的少，所以花的時間要長一些，我比較過，分子量小的藥物這兩種管子的血漿蛋白結合率沒有差異。 然后是考察吸附，因為藥物在膜上可能有吸附，吸附大就無法測準了，所以我是先用空白血漿制備一些超濾下清液（就是用4000轉10min一次不停的離心），用下清液配制你的藥物，然后再按常規(guī)速度和時間超濾，測定濾下來的液體中藥物的濃度，用同一根超濾管每次新鮮配制含藥物的液體后連續(xù)超濾，直至濾下來的液體和加進去的藥物濃度一致，說明連續(xù)超濾n次后飽和了。然后正式測定血漿蛋白結合率時就用這個次數(shù)去超濾。還有要確定一下血漿37℃孵育時間（因為你用的是外添加法，藥物和蛋白結合需要時間），一般是20min。最后是每一種液體都用其自身的基質配制標曲和質控后測定樣品，且測定的所有液體都要進行方法學驗證，比如下清液和血漿（包括線性范圍、殘留、干擾以及穩(wěn)定性），你試驗中遇得到的條件都必須驗證，用不到的就不用了（比如長期穩(wěn)定性、凍融等）。 |
3樓2014-04-03 14:53:15
liuzhaomin
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具體可以參考這篇文獻，步驟很詳細，通常用的都是密理博的超濾管（10k）。 http://pan.baidu.com/share/link? ... p;amp;uk=3542402689 |
2樓2014-03-28 17:26:52
4樓2014-04-04 09:03:27
xiao19920813
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5樓2019-09-10 11:48:46
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