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林曉蓓金蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教血漿蛋白結(jié)合率的問題 已有1人參與
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本人已經(jīng)測定完了血藥濃度，但是還想做此血漿蛋白結(jié)合率的測定，許多地方都不懂，查了文獻(xiàn)關(guān)于具體步驟少之又少，實(shí)在不解，望專業(yè)人士不吝賜教。 1關(guān)于具體膜的選擇，完全不懂 2具體的實(shí)驗(yàn)步驟 3關(guān)于方法的驗(yàn)證問題，是不是無論采用何種方法都要驗(yàn)證，比如我已經(jīng)建立了血藥濃度的HPLC的方法，但是如果要是在檢測經(jīng)過半透膜濾過的血漿樣品，是不是會有緩沖液的影響（我的流動相中沒有磷酸緩沖液）是不是要重新建立一套檢測方法，然后再做方法學(xué)的驗(yàn)證，最后在測定濃度。 |
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xiao19920813
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5樓2019-09-10 11:48:46
liuzhaomin
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【答案】應(yīng)助回帖
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具體可以參考這篇文獻(xiàn)，步驟很詳細(xì)，通常用的都是密理博的超濾管（10k）。 http://pan.baidu.com/share/link? ... p;amp;uk=3542402689 |
2樓2014-03-28 17:26:52
mechelle_113
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【答案】應(yīng)助回帖
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林曉蓓: 金幣+40, ★★★很有幫助 2014-04-04 09:02:06
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我用的是超濾法，買的是密理博的超濾管，一般打電話問有沒有做血漿蛋白結(jié)合率用的超濾管的話銷售會不清楚，因?yàn)槌瑸V管主要是用作濃縮蛋白的。所以你就知道是濃縮蛋白的超濾管就可以了。一般有10K，30K兩種，膜的話就只有一種，如果你的藥物分子量比較大的話建議使用30K，兩種孔徑的差別一在于分子量，二在于離心效率，10K離下來的少，所以花的時間要長一些，我比較過，分子量小的藥物這兩種管子的血漿蛋白結(jié)合率沒有差異。 然后是考察吸附，因?yàn)樗幬镌谀ど峡赡苡形剑酱缶蜔o法測準(zhǔn)了，所以我是先用空白血漿制備一些超濾下清液（就是用4000轉(zhuǎn)10min一次不停的離心），用下清液配制你的藥物，然后再按常規(guī)速度和時間超濾，測定濾下來的液體中藥物的濃度，用同一根超濾管每次新鮮配制含藥物的液體后連續(xù)超濾，直至濾下來的液體和加進(jìn)去的藥物濃度一致，說明連續(xù)超濾n次后飽和了。然后正式測定血漿蛋白結(jié)合率時就用這個次數(shù)去超濾。還有要確定一下血漿37℃孵育時間（因?yàn)槟阌玫氖峭馓砑臃�，藥物和蛋白結(jié)合需要時間），一般是20min。最后是每一種液體都用其自身的基質(zhì)配制標(biāo)曲和質(zhì)控后測定樣品，且測定的所有液體都要進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，比如下清液和血漿（包括線性范圍、殘留、干擾以及穩(wěn)定性），你試驗(yàn)中遇得到的條件都必須驗(yàn)證，用不到的就不用了（比如長期穩(wěn)定性、凍融等）。 |
3樓2014-04-03 14:53:15
林曉蓓
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4樓2014-04-04 09:03:27
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