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林曉蓓金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)教血漿蛋白結(jié)合率的問(wèn)題 已有1人參與
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本人已經(jīng)測(cè)定完了血藥濃度，但是還想做此血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定，許多地方都不懂，查了文獻(xiàn)關(guān)于具體步驟少之又少，實(shí)在不解，望專業(yè)人士不吝賜教。 1關(guān)于具體膜的選擇，完全不懂 2具體的實(shí)驗(yàn)步驟 3關(guān)于方法的驗(yàn)證問(wèn)題，是不是無(wú)論采用何種方法都要驗(yàn)證，比如我已經(jīng)建立了血藥濃度的HPLC的方法，但是如果要是在檢測(cè)經(jīng)過(guò)半透膜濾過(guò)的血漿樣品，是不是會(huì)有緩沖液的影響（我的流動(dòng)相中沒(méi)有磷酸緩沖液）是不是要重新建立一套檢測(cè)方法，然后再做方法學(xué)的驗(yàn)證，最后在測(cè)定濃度。 |
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liuzhaomin
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【答案】應(yīng)助回帖
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具體可以參考這篇文獻(xiàn)，步驟很詳細(xì)，通常用的都是密理博的超濾管（10k）。 http://pan.baidu.com/share/link? ... p;amp;uk=3542402689 |
2樓2014-03-28 17:26:52
mechelle_113
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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林曉蓓: 金幣+40, ★★★很有幫助 2014-04-04 09:02:06
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我用的是超濾法，買(mǎi)的是密理博的超濾管，一般打電話問(wèn)有沒(méi)有做血漿蛋白結(jié)合率用的超濾管的話銷售會(huì)不清楚，因?yàn)槌瑸V管主要是用作濃縮蛋白的。所以你就知道是濃縮蛋白的超濾管就可以了。一般有10K，30K兩種，膜的話就只有一種，如果你的藥物分子量比較大的話建議使用30K，兩種孔徑的差別一在于分子量，二在于離心效率，10K離下來(lái)的少，所以花的時(shí)間要長(zhǎng)一些，我比較過(guò)，分子量小的藥物這兩種管子的血漿蛋白結(jié)合率沒(méi)有差異。 然后是考察吸附，因?yàn)樗幬镌谀ど峡赡苡形剑酱缶蜔o(wú)法測(cè)準(zhǔn)了，所以我是先用空白血漿制備一些超濾下清液（就是用4000轉(zhuǎn)10min一次不停的離心），用下清液配制你的藥物，然后再按常規(guī)速度和時(shí)間超濾，測(cè)定濾下來(lái)的液體中藥物的濃度，用同一根超濾管每次新鮮配制含藥物的液體后連續(xù)超濾，直至濾下來(lái)的液體和加進(jìn)去的藥物濃度一致，說(shuō)明連續(xù)超濾n次后飽和了。然后正式測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率時(shí)就用這個(gè)次數(shù)去超濾。還有要確定一下血漿37℃孵育時(shí)間（因?yàn)槟阌玫氖峭馓砑臃ǎ幬锖偷鞍捉Y(jié)合需要時(shí)間），一般是20min。最后是每一種液體都用其自身的基質(zhì)配制標(biāo)曲和質(zhì)控后測(cè)定樣品，且測(cè)定的所有液體都要進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，比如下清液和血漿（包括線性范圍、殘留、干擾以及穩(wěn)定性），你試驗(yàn)中遇得到的條件都必須驗(yàn)證，用不到的就不用了（比如長(zhǎng)期穩(wěn)定性、凍融等）。 |
3樓2014-04-03 14:53:15
林曉蓓
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4樓2014-04-04 09:03:27
xiao19920813
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5樓2019-09-10 11:48:46
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