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jinnini125木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于原核表達(dá)誘導(dǎo)條件 已有3人參與
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本人用的是全式金的原核表達(dá)載體，根據(jù)說(shuō)明書(shū)37度誘導(dǎo)，設(shè)置時(shí)間梯度3.4.5三個(gè)梯度，IPTG濃度設(shè)置0.6 0.8 1.0三個(gè)梯度。未誘導(dǎo)的作為對(duì)照跑SDS-PAGE膠，結(jié)果如圖。目的條帶大約26KD，MARKER指示帶倒數(shù)第一是20KD左右，第二是29KD左右。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
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jinnini125
木蟲(chóng) (小有名氣)
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- 專(zhuān)業(yè): 園藝作物采后生物學(xué)
送紅花一朵 |
右邊最后一個(gè)是未誘導(dǎo)的對(duì)照。啥也沒(méi)加過(guò)，就在4度冰箱放著來(lái)著。但是，沒(méi)有做空載體對(duì)照。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
7樓2017-03-27 10:22:58
fengshen2005
銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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2樓2017-03-23 22:33:54
fengshen2005
銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2017-03-23 22:34:53
xinxiyuzhou
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-09 22:15:38
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-09 22:15:38
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應(yīng)該是表達(dá)了，你收集菌體，裂解一下，分別跑一個(gè)裂解液上清和沉淀看是包涵體還是可溶性表達(dá)，一般情況下不用摸時(shí)間和IPTG濃度和溫度梯度，37℃，4到6小時(shí)，iptg1mm就可以，做多了只是增加工作量，如果是包涵體表達(dá)，就需要考慮前面的因素了，你跑的這個(gè)膠沒(méi)有太大意義，連未誘導(dǎo)的對(duì)照也沒(méi)有，所以沒(méi)法給你建議，做實(shí)驗(yàn)一定要設(shè)置陰性對(duì)照 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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4樓2017-03-23 23:17:24
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