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jinnini125木蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于原核表達(dá)誘導(dǎo)條件 已有3人參與
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本人用的是全式金的原核表達(dá)載體，根據(jù)說(shuō)明書37度誘導(dǎo)，設(shè)置時(shí)間梯度3.4.5三個(gè)梯度，IPTG濃度設(shè)置0.6 0.8 1.0三個(gè)梯度。未誘導(dǎo)的作為對(duì)照跑SDS-PAGE膠，結(jié)果如圖。目的條帶大約26KD，MARKER指示帶倒數(shù)第一是20KD左右，第二是29KD左右。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-09 22:15:38
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應(yīng)該是表達(dá)了，你收集菌體，裂解一下，分別跑一個(gè)裂解液上清和沉淀看是包涵體還是可溶性表達(dá)，一般情況下不用摸時(shí)間和IPTG濃度和溫度梯度，37℃，4到6小時(shí)，iptg1mm就可以，做多了只是增加工作量，如果是包涵體表達(dá)，就需要考慮前面的因素了，你跑的這個(gè)膠沒有太大意義，連未誘導(dǎo)的對(duì)照也沒有，所以沒法給你建議，做實(shí)驗(yàn)一定要設(shè)置陰性對(duì)照 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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4樓2017-03-23 23:17:24
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9樓2017-03-27 11:24:32
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-09 22:16:03
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-09 22:16:03
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裂解不就是破碎細(xì)胞，用超聲波細(xì)胞破碎儀。然后看看破碎后菌液有沒有澄清，基本上澄清了就很少是包涵體，然后離心。取沉淀和上清，上清去純化就好了。再跑膠看看有沒有 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
12樓2017-03-27 12:24:44
fengshen2005
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2樓2017-03-23 22:33:54
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3樓2017-03-23 22:34:53
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從左到右是0.6mM，0.8，1.0 IPTG，37度3小時(shí)。37度4小時(shí)。37度5小時(shí)。最后第十個(gè)是未誘導(dǎo)。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2017-03-27 10:20:06
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8樓2017-03-27 10:23:55
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10樓2017-03-27 11:55:32
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