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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于原核表達誘導條件
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jinnini125木蟲 (小有名氣)
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關于原核表達誘導條件 已有3人參與
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本人用的是全式金的原核表達載體，根據(jù)說明書37度誘導，設置時間梯度3.4.5三個梯度，IPTG濃度設置0.6 0.8 1.0三個梯度。未誘導的作為對照跑SDS-PAGE膠，結果如圖。目的條帶大約26KD，MARKER指示帶倒數(shù)第一是20KD左右，第二是29KD左右。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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應該是表達了，你收集菌體，裂解一下，分別跑一個裂解液上清和沉淀看是包涵體還是可溶性表達，一般情況下不用摸時間和IPTG濃度和溫度梯度，37℃，4到6小時，iptg1mm就可以，做多了只是增加工作量，如果是包涵體表達，就需要考慮前面的因素了，你跑的這個膠沒有太大意義，連未誘導的對照也沒有，所以沒法給你建議，做實驗一定要設置陰性對照 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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jinnini1254樓2017-03-23 23:17:24
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9樓2017-03-27 11:24:32
【答案】應助回帖
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裂解不就是破碎細胞，用超聲波細胞破碎儀。然后看看破碎后菌液有沒有澄清，基本上澄清了就很少是包涵體，然后離心。取沉淀和上清，上清去純化就好了。再跑膠看看有沒有 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
12樓2017-03-27 12:24:44
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10樓2017-03-27 11:55:32
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