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fuyiwy新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
trizol 法提取植物總RNA. 已有2人參與
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| 本人最近在用trizol法提取植物總RNA，但不知道所用方法是不是最優(yōu)化，求trizol法提取植物總RNA比較優(yōu)化的方法以及后續(xù)的瓊脂糖凝膠檢測(cè)RNA質(zhì)量的具體操作步驟和注意事項(xiàng)。謝謝各位大神指點(diǎn)了�。� |
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qingchul
新蟲(chóng) (小有名氣)
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5樓2016-05-28 10:15:34
jackyoung
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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看啥植物和什么組織了，富含多糖多酚的用Trizol效果不好。瓊脂糖電泳很簡(jiǎn)單，最好用DEPC水配緩沖液，專(zhuān)用的電泳槽，1.2%的膠，最好將樣品預(yù)染，總上樣量1ug左右（此處為我們實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)體系，因檢測(cè)方法而異） 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2016-03-07 21:12:51
悠然8912
新蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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fuyiwy: 金幣+3, ★有幫助 2016-03-09 14:29:37
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首先所有的離心管研缽鑷子藥匙等用具都要做除RNA酶處理，這是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。 1ml 提取液里加適當(dāng)液氮研磨的組織粉末充分混勻，靜置5min,離心5min,取上清加五分之一提取液體積的氯仿混勻，靜置5min，離心15min，取上清加等體積異丙醇靜置10min離心10min，棄上清，沉淀加75%乙醇離心5min，空干乙醇加RNase free water溶解RNA即可。 電泳的話最好是專(zhuān)門(mén)跑RNA的一套裝置，我們用TAE 跑10min就行。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2016-03-07 22:19:56
a314919473
銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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fuyiwy: 金幣+2, ★有幫助 2016-03-09 14:32:30
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如2樓所說(shuō)，多糖多酚的植物只能用專(zhuān)門(mén)的植物RNA提取試劑盒。 提取RNA么有那么多講究，一個(gè)字快，一般提取2個(gè)樣，從液氮研磨開(kāi)始到RNA溶解在水中，60分鐘以?xún)?nèi)。 不是讓你手忙腳亂，是一步一步中間不要閑著，一口氣按照試劑盒說(shuō)明書(shū)做，肯定沒(méi)問(wèn)題，順便說(shuō)下，我是生物公司的，所以這方面比較有經(jīng)驗(yàn)。 |
4樓2016-03-08 11:03:32
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