 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4951 | 回復(fù): 22 | ||||
fuchange918木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
Trizol 法怎么提取高質(zhì)量RNA 已有5人參與
|
|
本人實(shí)驗(yàn)真菌用Trizol法提取RNA后，跑膠驗(yàn)證降解程度還可以忍受，但是污染方面很嚴(yán)重：OD260/280=1.5左右，OD260/230=1.0左右，后期需要做RACE 主要有一下問題： （1）試驗(yàn)中哪些試劑需要預(yù)冷（4度還是-20℃），比如氯仿、異丙醇、75%乙醇 （2）每次異丙醇沉淀離心后，管壁上總是粘有和底部沉淀一樣的東西，而且沉淀用DEPC處理水溶解時(shí)總是不能全部溶解，應(yīng)該怎么解決？ （3）還有就這這么步驟中的放置時(shí)間，幫我看看有沒有問題，是過長還是過短 本人RNA提取步驟： 1、細(xì)胞或組織加 Trizol 后，室溫放置 5min，使其充分裂解。。 2、12,000rpm 離心 10min，棄沉淀。 3、按 200ul 氯仿/ml Trizol 加入氯仿，上下顛倒混勻后冰上放置5min。 4、4℃ 12,000g 離心 15min。 5、吸取上層水相，至另一離心管中 6、按 0.5ml 異丙醇/ml Trizol 加入異丙醇混勻，冰浴放置10min。 7、4℃ 12,000g 離心 10min，棄上清，RNA 沉于管底。 8、按 1ml 75%乙醇/ml Trizol 加入 75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。 9、 4℃ 8,000g 離心 5min，盡量棄上清。 10、室溫晾干或真空干燥 5-10min。注：RNA 樣品不要過于干燥，否則很難溶解。 11、可用 30ul DEPC處理水溶解RNA樣品 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 生物技術(shù)/方法講解 | 經(jīng)驗(yàn)方法/使用說明 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有229人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 為什么trizol法提總RNA，電泳結(jié)果只有一條很亮的帶
已經(jīng)有4人回復(fù)
- Trizol提取的RNA有粘稠，跑膠有amear，怎么處理？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 用TRIzol提白色念珠菌RNA，發(fā)現(xiàn)沒法破壁，那么在用TRIzol提之前，該怎么預(yù)處理啊，
已經(jīng)有7人回復(fù)
- RNA提取結(jié)果，我提了好多次，傳說中的高質(zhì)量沒出現(xiàn)
已經(jīng)有19人回復(fù)
- Trizol 法 RNA提取失敗 請蟲友幫忙分析下 什么原因?該怎么辦吖
已經(jīng)有18人回復(fù)
- trizol 提RNA，DNA酶的問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 提取RNA加Trizol后變質(zhì)
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 提取RNA是直接加Trizol還是胰酶消化后加Trizol？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 分子生物學(xué)-RNA提取-采用Trizol 溶液提取細(xì)菌總RNA （來自云端實(shí)驗(yàn)室）
已經(jīng)有5人回復(fù)
- trizol法手提蝦腸道RNA電泳圖，求分析
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 如何用trizol試劑保存RNA提取材料？請各位前輩指點(diǎn)指點(diǎn)，不甚感激！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- TRIZOL法提取NP69細(xì)胞的RNA
已經(jīng)有3人回復(fù)
- invitrogen 的RNA提取中文版 trizol 法
已經(jīng)有235人回復(fù)
- Trizol 如何提起細(xì)胞培養(yǎng)液中的病毒RNA
已經(jīng)有8人回復(fù)
- RNA 提取的一些問題，請大家?guī)兔卮?/a>
已經(jīng)有13人回復(fù)
- RNA提取TRIZOL法最關(guān)鍵的注意步驟是什么
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】提總的RNA的試劑是RNAiso效果好還是Trizol效果好
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 【求助/交流】trizol 提ＲＮＡ中的一些問題
已經(jīng)有24人回復(fù)
a314919473
銀蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 48 (小學(xué)生)
- 金幣: 981.2
- 散金: 188
- 紅花: 10
- 沙發(fā): 17
- 帖子: 1122
- 在線: 89.5小時(shí)
- 蟲號: 3398651
- 注冊: 2014-09-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因組學(xué)
2樓2014-09-05 14:50:54
fuchange918
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 2368.4
- 紅花: 4
- 帖子: 716
- 在線: 151.7小時(shí)
- 蟲號: 1727732
- 注冊: 2012-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 食用真菌學(xué)
3樓2014-09-05 15:38:53
niil
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 35 (小學(xué)生)
- 金幣: 6673.5
- 紅花: 3
- 帖子: 835
- 在線: 233.2小時(shí)
- 蟲號: 876426
- 注冊: 2009-10-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金幣+2, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-09-05 17:18:09
fuchange918: 金幣+3, ★有幫助 2014-09-05 21:03:41
gyesang: 金幣+2, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-09-05 17:18:09
fuchange918: 金幣+3, ★有幫助 2014-09-05 21:03:41
|
所需氯仿 乙醇 異丙醇常溫即可。 離心的時(shí)候4度，其他操作常溫也沒有問題的。 第6步，一般還是加入等體積的異丙醇來沉淀。 “每次異丙醇沉淀離心后，管壁上總是粘有和底部沉淀一樣的東西，”跟離心時(shí)不平衡有關(guān)。 污染嚴(yán)重的話，可能是樣品量比較大，抽提不徹底，蛋白含量高吧。 提RNA的組織量不需要太大。 |
4樓2014-09-05 15:56:04
a314919473
銀蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 48 (小學(xué)生)
- 金幣: 981.2
- 散金: 188
- 紅花: 10
- 沙發(fā): 17
- 帖子: 1122
- 在線: 89.5小時(shí)
- 蟲號: 3398651
- 注冊: 2014-09-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因組學(xué)
5樓2014-09-05 15:58:24
a314919473
銀蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 48 (小學(xué)生)
- 金幣: 981.2
- 散金: 188
- 紅花: 10
- 沙發(fā): 17
- 帖子: 1122
- 在線: 89.5小時(shí)
- 蟲號: 3398651
- 注冊: 2014-09-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因組學(xué)
6樓2014-09-05 16:01:13
7樓2014-09-05 16:31:39
fuchange918
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 2368.4
- 紅花: 4
- 帖子: 716
- 在線: 151.7小時(shí)
- 蟲號: 1727732
- 注冊: 2012-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 食用真菌學(xué)
8樓2014-09-05 21:02:53
xipha
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 41 (小學(xué)生)
- 金幣: 4332.1
- 紅花: 12
- 帖子: 881
- 在線: 160.1小時(shí)
- 蟲號: 447837
- 注冊: 2007-11-01
- 專業(yè): 生物化學(xué)
9樓2014-09-06 04:30:41
fuchange918
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 2368.4
- 紅花: 4
- 帖子: 716
- 在線: 151.7小時(shí)
- 蟲號: 1727732
- 注冊: 2012-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 食用真菌學(xué)
10樓2014-09-06 08:10:54
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 fuchange918 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計(jì)算機(jī)技術(shù) +3 | solanXXX 2026-03-20 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工 +6 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 295復(fù)試調(diào)劑
+7
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +4 | 申子申申 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)，327分，材料與化工085600 +5 | Ncdx123456 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 26研0 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +10 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 志存高遠(yuǎn)意在機(jī)?/a> 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|