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joyjane88

銅蟲 (初入文壇)

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[求助] RNAiso plus / Trizol 提取細(xì)菌總RNA疑問已有1人參與

大家好，
Sample Text買了takara的RNAiso plus，提取感染的植物組織沒有問題，但是提取純培養(yǎng)的細(xì)菌（液體培養(yǎng)基）的RNA時卻很不順利。之前沒有任何經(jīng)驗(yàn)，查了一些資料，還是有很多疑問，在此請教大家：

1.菌體（革蘭氏陰性菌）需不需要提前破壁？我查到的文獻(xiàn)和方法介紹，都是收集完菌體直接加RNAiso plus。但是查到用柱式試劑盒的方法里都有溶菌酶處理這一步。
2.菌體量和RNAiso plus用量的比例是多少比較合適？按細(xì)菌細(xì)胞數(shù)對應(yīng)還是按菌體濕重對應(yīng)？10的9次方菌還是100mg濕菌體對應(yīng)1ml RNAiso plus?產(chǎn)量如何？

望有實(shí)際經(jīng)驗(yàn)的蟲友不吝賜教！謝謝

回復(fù)此樓

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1樓 2014-10-15 15:20:24

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wangranjun

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廣庭之惘然

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【答案】應(yīng)助回帖

沒有必要去專門破壁的，對結(jié)果影響不大哎！我們一般都是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)加Trizol，不過按照菌體重量進(jìn)行換算更好一些……

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回復(fù)此樓

他日揚(yáng)翼九萬里，歷大千世界，定我紅塵心！

2樓2014-10-21 17:46:46