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[求助]
保肝活性研究。 已有3人參與
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各位蟲友，本人最近在設(shè)計藥物保肝活性篩選實驗方案。對于選用正常肝細胞和hepg2細胞做細胞實驗有些糾結(jié)。誰能告訴我，他們之間哪個好。我主要是篩藥的保肝活性。急急急，非常感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
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york6999
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【答案】應(yīng)助回帖
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1. 大鼠以3％戊巴比妥鈉60mg/kg麻醉后，依次碘酒、乙醇消毒； 2. 以十字型切口打開腹腔，暴露內(nèi)臟，將腸管推向腹腔的左側(cè)，暴露出下腔靜脈和門靜脈，首先游離出下腔靜脈，將膽總管結(jié)扎。然后分離門靜脈，將其分支一一結(jié)扎，并在門靜脈的近端和遠端分別預(yù)置“0”號絲線一根，用針管內(nèi)預(yù)先吸有肝素的l8號套管針穿刺門靜脈，退出針芯，見門靜脈有回血后結(jié)扎固定，迅速接通灌注系統(tǒng)，并剪開下腔靜脈建立流出道，以20ml/min的速率灌注預(yù)灌注液(37℃)，同時將肝臟完整地分離下來，置入一平皿中； 3. 灌注約10 min后，肝臟完全變?yōu)榈S褐色，關(guān)閉預(yù)灌注液三通開關(guān)，以15 ml／min速率灌注50 ml(25 mg)鏈蛋白酶E灌注液，然后再以15 ml／min速率灌注含Ⅳ型膠原酶的灌注液(37℃)； 4. 將一根一次性輸液管一端浸入培養(yǎng)皿液面以下，另一端插入膠原酶溶液瓶，建立膠原酶的循環(huán)灌注； 5. 20～25 min后，當(dāng)肝臟組織完全變軟，撕去肝包膜，去除結(jié)締組織，鈍性粉碎肝組織制備細胞懸液 6. 分同管 7. 加CCl4 及加保肝樣品或溶劑 8. 37℃ 1-2hr 9. 看細胞數(shù) 量GPT/GOT http://pan.baidu.com/s/1dEzibVN ----------------------------------------------------------------------------------- 也可用老鼠體內(nèi)做 不分肝細胞 http://www.wjgnet.com/1009-3079/6/19.asp http://www.yp900.com/lunwen_jichuyixue/450.htm |
5樓2016-03-24 12:54:25
york6999
木蟲之王 (知名作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
qbby(卓越_先鋒代發(fā)): 金幣+5, 謝謝回復(fù) 2016-03-24 10:18:26
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
qbby(卓越_先鋒代發(fā)): 金幣+5, 謝謝回復(fù) 2016-03-24 10:18:26
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保肝當(dāng)然用正常肝細胞做保肝實驗好了 如果用HEG2做保肝實驗 有人會懷疑你的東西是否只保護癌細胞 甚至?xí)碳ぐ┥L 用正常肝細胞做的不好處是要從活體分離 要殺生 從大鼠分離肝細胞技術(shù)不難 但花時間練 去買現(xiàn)成的又貴又難復(fù)活 用Heg2 平宜且比正常肝細胞易養(yǎng) 如果只為發(fā)表 便投用Heg2做保肝實驗的期刋 最重要的是你那兒的設(shè)備和有沒有人會以上技術(shù) |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2016-03-23 22:21:20
3樓2016-03-24 06:15:24
4樓2016-03-24 06:21:06
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