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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)

[交流] 請(qǐng)問(wèn)我做pcr的時(shí)候有條帶，但是膠回收的時(shí)候怎么沒(méi)條帶了啊

請(qǐng)問(wèn)我做pcr的時(shí)候有條帶，但是膠回收的時(shí)候怎么沒(méi)條帶了��？

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sandycool

鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
★
雨落wang(金幣+1): 謝謝參與
膠回收操作的問(wèn)題

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6樓2016-04-08 09:01:09
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
3樓: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-07 18:05:44
你切膠的時(shí)候有條帶么？如果有，就是回收過(guò)程中出問(wèn)題了

切的時(shí)候有啊，回收的時(shí)候也按照說(shuō)明進(jìn)行的，都做過(guò)幾次重復(fù)了！

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12樓2016-04-08 19:29:12
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原海亮

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
★
雨落wang(金幣+1): 謝謝參與
你切膠的時(shí)候有條帶么？如果有，就是回收過(guò)程中出問(wèn)題了

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3樓2016-04-07 18:05:44
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屋檐下的等待

新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
回收沒(méi)有的肯定是回收過(guò)程的問(wèn)題了

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7樓2016-04-08 09:07:05
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仇峰12306

鐵蟲(chóng) (小有名氣)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
回收之后沒(méi)有嘛？是不是試劑盒污染了
8樓2016-04-08 09:10:24
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310013

金蟲(chóng) (小有名氣)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
樓主確定你看到的是條帶而不是某些非特異性的東西？不是每個(gè)可以看到的 都是核酸條帶
9樓2016-04-08 12:26:38
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松風(fēng)山人

銅蟲(chóng) (小有名氣)
10樓2016-04-08 12:36:52
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781055707

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
你用的是PET系列吧，我一般切4管50UL的體系，膠回收后跑電泳才勉強(qiáng)看得見(jiàn)。
11樓2016-04-08 14:13:33
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
6樓: Originally posted by sandycool at 2016-04-08 09:01:09
膠回收操作的問(wèn)題

是按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行的啊

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13樓2016-04-08 19:29:54
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
8樓: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-08 09:10:24
回收之后沒(méi)有嘛？是不是試劑盒污染了

新買(mǎi)的盒子啊

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14樓2016-04-08 19:30:30
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
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9樓: Originally posted by 310013 at 2016-04-08 12:26:38
樓主確定你看到的是條帶而不是某些非特異性的東西？不是每個(gè)可以看到的 都是核酸條帶

就是最下面這條最亮的條帶啊
請(qǐng)問(wèn)我做pcr的時(shí)候有條帶，但是膠回收的時(shí)候怎么沒(méi)條帶了啊



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15樓2016-04-08 19:33:47
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
11樓: Originally posted by 781055707 at 2016-04-08 14:13:33
你用的是PET系列吧，我一般切4管50UL的體系，膠回收后跑電泳才勉強(qiáng)看得見(jiàn)。

上面沒(méi)說(shuō)體系啊，就是用的天根的試劑盒

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16樓2016-04-08 19:35:35
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原海亮

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
引用回帖:
12樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 19:29:12
切的時(shí)候有啊，回收的時(shí)候也按照說(shuō)明進(jìn)行的，都做過(guò)幾次重復(fù)了！
...

你那條帶濃度太低了，pcr特異性也不好，先把pcr產(chǎn)物濃度提高一下

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17樓2016-04-08 22:38:10
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shx0743

新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
膠回收之前條帶亮么，我以前粗略算過(guò)，膠回收效率只有20％，如果你膠回收的帶子就不是很明顯，那么回收回來(lái)的可能性不大！

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18樓2016-04-08 22:56:16
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
17樓: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-08 22:38:10
你那條帶濃度太低了，pcr特異性也不好，先把pcr產(chǎn)物濃度提高一下
...

請(qǐng)問(wèn)濃度怎么提高啊？

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19樓2016-04-08 22:56:34
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
18樓: Originally posted by shx0743 at 2016-04-08 22:56:16
膠回收之前條帶亮么，我以前粗略算過(guò)，膠回收效率只有20％，如果你膠回收的帶子就不是很明顯，那么回收回來(lái)的可能性不大！

條帶只有這么亮
請(qǐng)問(wèn)我做pcr的時(shí)候有條帶，但是膠回收的時(shí)候怎么沒(méi)條帶了啊-1



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20樓2016-04-08 22:59:35
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sunqx

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
21樓2016-04-08 23:00:26
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
21樓: Originally posted by sunqx at 2016-04-08 23:00:26
有帶較弱

就是，加了6微升的模版，50微的體系，

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22樓2016-04-08 23:04:10
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sunqx

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
你這總共也就二三十ng,能回收回十就了不得了，加三十的水，濃度才三分之一ngul

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23樓2016-04-08 23:09:21
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
23樓: Originally posted by sunqx at 2016-04-08 23:09:21
你這總共也就二三十ng,能回收回十就了不得了，加三十的水，濃度才三分之一ngul

那我是應(yīng)該增加模版的量嗎？

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24樓2016-04-08 23:13:40
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shx0743

新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
引用回帖:
20樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 22:59:35
條帶只有這么亮

...

那肯定不行，上樣幾微？如果是5ul的話(huà)，你多做幾管吧，摸一下退火溫度，看看哪個(gè)溫度條帶更清晰，我每次p，上樣3ul，跑出的帶子比marker中最亮的條帶亮都要做2管以上才會(huì)去膠回收

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25樓2016-04-09 06:16:01
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
25樓: Originally posted by shx0743 at 2016-04-09 06:16:01
那肯定不行，上樣幾微？如果是5ul的話(huà)，你多做幾管吧，摸一下退火溫度，看看哪個(gè)溫度條帶更清晰，我每次p，上樣3ul，跑出的帶子比marker中最亮的條帶亮都要做2管以上才會(huì)去膠回收
...

哦，好的，謝謝

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26樓2016-04-09 08:19:19
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
26樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-09 08:19:19
哦，好的，謝謝
...

我上樣6微，50微體系做的pcr

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27樓2016-04-09 08:20:37
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仇峰12306

鐵蟲(chóng) (小有名氣)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
引用回帖:
14樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 19:30:30
新買(mǎi)的盒子啊
...

你用這個(gè)回收過(guò)別的嗎？如果別的沒(méi)問(wèn)題，那試劑盒沒(méi)問(wèn)題。還有就是看到你的圖，感覺(jué)你的條帶特別暗，你需要的主帶大概在多少��？
28樓2016-04-09 09:20:40
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黃啟秀

新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
★
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我也有同樣問(wèn)題，樓主解決了么～苦惱

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29樓2016-04-09 09:53:27
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
28樓: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 09:20:40
你用這個(gè)回收過(guò)別的嗎？如果別的沒(méi)問(wèn)題，那試劑盒沒(méi)問(wèn)題。還有就是看到你的圖，感覺(jué)你的條帶特別暗，你需要的主帶大概在多少��？...

70bp左右

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30樓2016-04-09 10:07:44
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
29樓: Originally posted by 黃啟秀 at 2016-04-09 09:53:27
我也有同樣問(wèn)題，樓主解決了么～苦惱

沒(méi)有，苦惱中

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31樓2016-04-09 10:08:15
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
28樓: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 09:20:40
你用這個(gè)回收過(guò)別的嗎？如果別的沒(méi)問(wèn)題，那試劑盒沒(méi)問(wèn)題。還有就是看到你的圖，感覺(jué)你的條帶特別暗，你需要的主帶大概在多少��？...

還沒(méi)回收過(guò)其他的

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32樓2016-04-09 10:08:57
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仇峰12306

鐵蟲(chóng) (小有名氣)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
引用回帖:
30樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-09 10:07:44
70bp左右
...

我們回收的片段如果太小的話(huà)，我們用的是生工的，說(shuō)明書(shū)上寫(xiě)著需要加異丙醇好像。而且你的片段這么小孩不太亮，如果做PCR方便的話(huà)可以多做幾個(gè)，或者將PCR產(chǎn)物濃縮下試試，切膠點(diǎn)樣的時(shí)候多點(diǎn)幾微升。然后過(guò)一個(gè)柱子試試。切膠回收效率不管是哪家好像都不太高。
33樓2016-04-09 10:46:39
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
引用回帖:
33樓: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 10:46:39
我們回收的片段如果太小的話(huà)，我們用的是生工的，說(shuō)明書(shū)上寫(xiě)著需要加異丙醇好像。而且你的片段這么小孩不太亮，如果做PCR方便的話(huà)可以多做幾個(gè)，或者將PCR產(chǎn)物濃縮下試試，切膠點(diǎn)樣的時(shí)候多點(diǎn)幾微升。然后過(guò)一個(gè)柱 ...

Pcr產(chǎn)物怎么濃縮��？

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34樓2016-04-09 11:03:22
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仇峰12306

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引用回帖:
34樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-09 11:03:22
Pcr產(chǎn)物怎么濃縮��？
...

就是你PCR產(chǎn)物洗滌嗎?我們之前就是洗滌完了之后加水的時(shí)候少加點(diǎn)之前如果是50的話(huà)之后就加20-30。但是我們沒(méi)做過(guò)70bp的，我們有200.300的時(shí)候一般洗完后加20的水
35樓2016-04-09 14:26:47
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雨落wang

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引用回帖:
35樓: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 14:26:47
就是你PCR產(chǎn)物洗滌嗎?我們之前就是洗滌完了之后加水的時(shí)候少加點(diǎn)之前如果是50的話(huà)之后就加20-30。但是我們沒(méi)做過(guò)70bp的，我們有200.300的時(shí)候一般洗完后加20的水...

哦，好的，謝謝

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36樓2016-04-09 14:49:34
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小林櫻雪

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送紅花一朵
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1樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-07 17:30:17
請(qǐng)問(wèn)我做pcr的時(shí)候有條帶，但是膠回收的時(shí)候怎么沒(méi)條帶了��？

有沒(méi)有可能是切錯(cuò)了

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37樓2016-04-09 16:29:28
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雨落wang

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引用回帖:
37樓: Originally posted by 小林櫻雪 at 2016-04-09 16:29:28
有沒(méi)有可能是切錯(cuò)了
...

應(yīng)該不會(huì)吧，跟文獻(xiàn)上產(chǎn)物大小差不多的位置啊

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38樓2016-04-09 19:59:20
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Gao-Rui

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★
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問(wèn)題不清楚，說(shuō)的再細(xì)點(diǎn)。是膠回收之后嘛？
39樓2016-04-09 22:08:27
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781055707

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
引用回帖:
16樓: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 19:35:35
上面沒(méi)說(shuō)體系啊，就是用的天根的試劑盒
...

70BP還膠回收呀，那個(gè)膜會(huì)過(guò)濾掉100BP以下的條帶的，連T載體吧，設(shè)計(jì)下思路看行不行，200BP以下都可能是引物二聚體。
40樓2016-04-10 03:37:21
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雨落wang

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40樓: Originally posted by 781055707 at 2016-04-10 03:37:21
70BP還膠回收呀，那個(gè)膜會(huì)過(guò)濾掉100BP以下的條帶的，連T載體吧，設(shè)計(jì)下思路看行不行，200BP以下都可能是引物二聚體。...

��？這樣啊，

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41樓2016-04-10 08:31:35
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雨落wang

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39樓: Originally posted by Gao-Rui at 2016-04-09 22:08:27
問(wèn)題不清楚，說(shuō)的再細(xì)點(diǎn)。是膠回收之后嘛？

是啊，膠回收之后再跑電泳就沒(méi)條帶了

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42樓2016-04-10 08:32:30
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804371539

銅蟲(chóng) (小有名氣)
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可能引物二聚體，因?yàn)樵?00bp以下了，回收是有效率的吧，我用的試劑盒有一步是讓乙醇揮發(fā)干凈，不然抑制下游反應(yīng)。
43樓2016-04-10 09:06:54
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雨落wang

新蟲(chóng) (初入文壇)
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43樓: Originally posted by 804371539 at 2016-04-10 09:06:54
可能引物二聚體，因?yàn)樵?00bp以下了，回收是有效率的吧，我用的試劑盒有一步是讓乙醇揮發(fā)干凈，不然抑制下游反應(yīng)。

哦，謝謝啊

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44樓2016-04-10 12:02:33
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wq1727

新蟲(chóng) (初入文壇)
沒(méi)回收到DNA吧，
45樓2019-03-29 21:36:36
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tan9142樓
2016-04-07 18:05   回復(fù)  
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