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[求助]
PCR后跑膠沒有任何條帶 已有17人參與
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自己設(shè)計(jì)了10對(duì)引物,跑膠沒有任何條帶,10對(duì)引物都沒有出條帶,可能原因是什么?是不是說明引物設(shè)計(jì)的不好? 因?yàn)椋?.同樣的cDNA,用別人的引物(同一植物的其他基因引物)就有條帶。2.做了溫度梯度PCR,每個(gè)溫度梯度都沒有條帶,3 用引物直接跑膠,引物有條帶,說明引物存在(我擔(dān)心稀釋的時(shí)候引物不小心散出來),4 ,請(qǐng)問還能做些什么來找出問題產(chǎn)生的原因 可是設(shè)計(jì)引物的時(shí)候什么二聚體,錯(cuò)配,跨內(nèi)含子的網(wǎng)上書上找到的哪些能注意的我都注意了,為什么沒有條帶,請(qǐng)問引物設(shè)計(jì)還要注意什么? |
木蟲 (正式寫手)
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1. 你可以再試試用Genomic DNA跑PCR,做一個(gè)陽性對(duì)照,就是你所說的別人的引物。如果有條帶,那么原因可能出現(xiàn)在引物設(shè)計(jì)時(shí)設(shè)計(jì)在了內(nèi)含子上或者剛好跨內(nèi)含子了。 也有可能原因不出現(xiàn)在設(shè)計(jì)上: 2. 重新比對(duì)你的引物序列是否在送往公司合成時(shí)序列給錯(cuò),我們實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)過這樣的情況哈 3. R端引物送合成時(shí)有沒有反向,有的軟件設(shè)計(jì)時(shí)不會(huì)自動(dòng)反向的,需調(diào)整。 4. 引物稀釋時(shí)有沒有搞混? |

銀蟲 (初入文壇)
鐵桿木蟲 (正式寫手)




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